猪腹泻病毒可视化基因芯片的两种靶基因标记技术的比较
本研究同时采用常规PCR和不对称PCR分别进行靶基因的生物素标记,应用于金标银染可视化芯片,分析其对猪腹泻病毒可视化芯片杂交效率的影响.选取PEDV的S和M基因,TGEV的N和S基因,GAR的VP7和NSP4基因设计引物.根据目的基因片段设计探针,在其5”端修饰15个T碱基后利用芯片点样仪喷制芯片.应用常规PCR和不对称PCR两种标记方法,进行生物素掺入标记,在相同条件下与芯片进行杂交.利用生物素-链霉亲和素的系统,将链霉亲和素修饰的纳米金引入反应体系,通过银染显色后直接眼观结果.结果表明应用此可视化芯片特异性好,CSFV,PRRSV,PCV-2,JEV杂交结果呈阴性.不对称PCR标记法可有效的提高杂交效率,不对称PCR和常规PCR标记技术的最低检测浓度分别为105copies·μL-1和107copies·μL-1,前者灵敏性是后者10-100倍.应用不对称PCR对样品进行生物素标记,可明显提高腹泻病毒可视化芯片的杂交效率,有利于检测型可视化芯片的应用.
猪病毒性腹泻 病理诊断 可视化基因芯片 靶基因标记
马锐 文心田 杨国淋 滑翔 赵玉佳 黄小波 曹三杰 文翼平 伍锐
四川农业大学动物医学院猪病研究中心,成都611130;成都大熊猫研究基地,成都610000 四川农业大学动物医学院猪病研究中心,成都611130;农业部兽用药物与兽医诊断技术四川科学观测实验站,成都611130 四川农业大学动物医学院猪病研究中心,成都611130
国内会议
四川梓潼
中文
248-254
2017-12-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）