犬小孢子菌、石膏样小孢子菌、须毛癣菌多重PCR 检测方法的建立及初步应用
宠物浅表皮肤真菌病主要由犬小孢子菌、石膏样小孢子菌、须毛癣菌感染引起。本研究旨在建立一种快速检测这三种真菌病原的多重PCR方法。根据真菌ITS区域的序列差异设计了4条引物,优化了多重PCR反应条件,同时对其特异性、灵敏性、重复性进行分析。结果显示,建立的多重PCR方法对犬小孢子菌、石膏样小孢子菌、须毛癣菌基因组DNA均可扩增出特异性预期片段,条带大小分别为286bp、596bp、188bp;最低检测限(灵敏性)分别为12.6pg/μl、8.8pg/μl和13.6pg/μl;被检测的6份人工模拟样品扩增结果准确。应用该多重PCR方法检测27份人临床皮屑样品和43份宠物犬、猫毛发样品,结果显示其阳性检出率分别为74.07％(20/27)和83.72％(36/43)；采用常规真菌分离培养法从阳性样品中获得10株致病性真菌,分离率为17.86%(10/56)；两种检测方法的种属鉴定结果表明多重PCR法优于常规方法。本试验建立的多重PCR检测方法简便、特异、灵敏,可同时对宠物浅表真菌病原作出快速诊断与鉴别。
犬皮肤真菌病 小孢子菌 石膏样小孢子菌 须毛癣菌 病原检测 多重聚合酶链式反应
钱晶 欧阳伟 王晶宇 姚凌云 吴世妍 王晓丽 潘群兴 夏兴霞 诸玉梅 刘军 刘国芳 王永山
江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程重点实验室,南京 210014 南京大学医学院 附属鼓楼医院皮肤科,南京210008 江苏农林职业技术学院畜牧兽医学院,镇江212400
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2017-12-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）