骨髓源神经祖细胞的培养及细胞学特性
(0) 目的：通过神经干细胞悬浮培养法,获取骨髓源神祖细胞(BM-NPCs),观察分析BM-NPCs细胞学特性. 方法：采用全骨髓贴壁培养法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞(BM-MSCs),观察原代及传代细胞的形态及增殖特点,采用流式细胞术检测表面标志物.将第3代BM-MSCs转移到无血清神经干细胞培养基Neurobal-Amedium,加1％N2-supplement、2％B27、2mmol/LL-谷氨酰胺和20ng/mlbFGF&EGF的悬浮培养瓶诱导培养.48h后可见部分细胞聚集成团悬浮生长,AccutaseTM酶消化传代,其中部分细胞具有成球悬浮增殖生长能力,取第三代骨髓来源细胞球备用.通过流式细胞术检测这种骨髓来源细胞球的细胞周期,用细胞免疫荧光和RT-PCR方法等鉴定其多项向分化潜能与神经祖细胞相关基因蛋白表达情况,并进行成脂能力检测. 结果：课题培养的BM-MSCs符合国际干细胞对BM-MSCs的鉴定标准,经流式细胞鉴定CD34/45/3/4/11b/14/133(-)和CD29/105(+).通过神经干细胞悬浮培养法多次传代扩增获取的骨髓来源细胞球,经流式细胞周期检测发现,第3代细胞球79.2％的细胞停滞在G0/G1期;细胞免疫荧光鉴定表达SOX2/CD133/Nestin蛋白;半定量RT-PCR检测细胞球mRNA水平结果显示,较强表达c-myc/klf4/sox2,弱表达Sca-1,不表达0ct4的多能干细胞基因特点,具有较强表达Muashil1/CD184/CD133,表达CD56/Nestin/Muashil2/Notch1神经祖细胞基因特点,同时,具有成脂诱导分化能力,诱导脂滴红油O染色阳性. 结论：采用神经干细胞悬浮培养法,从BM-MSCs中获取的骨髓来源细胞球,表达神经祖细胞基因和蛋白,具有向神经细胞分化倾向等神经祖细胞特点,保留多向分化潜能.
骨髓源神经祖细胞 全骨髓贴壁培养法 细胞形态 细胞增殖
白文芳 张鸣生
广东省人民医院
国内会议
第八届粤港澳台物理医学与康复学学术会议暨2017年广东省医学会物理医学与康复学学术年会
广州
中文
51-59
2017-07-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）