基于LPS诱导人冠状动脉平滑肌细胞炎性活化的热毒生风型络风内动细胞模型构建
目的:利用脂多糖(LPS)诱导体外培养的人冠状动脉平滑肌细胞(HCASMC)TLR4-MyD88炎症通路活化,建立热毒生风型络风内动细胞模型,为络风内动研究平台的科学化寻求新突破. 方法:体外原代培养HCASMC,用MTT法检测不同浓度(O,0.01,0.1,0.5,1,5,10,100μg/ml)LPS对HCASMC活力的影响,筛选出HCASMC活力在98％以上的LPS无毒性浓度范围.用ELISA法检测无毒性浓度范围内的LPS作用不同时间(6h,24h,48h)对细胞上清IL-6,TNF-α和IL-1β释放水平的影响,筛选出小范围LPS干预浓度和作用时间,继而用RT-PCR法对IL-6,TNF-α,IL-1β,TLR4,MyD88,NF-κB p65mRNA进行半定量检测,用Western blotting法检测TLR4,MyD88,NF-κB p65蛋白表达变化,确定最终造模条件. 结果:MTT示LPS在5μg/ml和100u g/m1浓度时细胞活力低于98％,其余浓度均可促进HCASMC生长,为下一步实验所需的无毒性浓度范围;ELISA结果显示0.5u g/ml和1μg/ml的LPS干预24h、48h都可显著诱导产生炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α(P＜O.05);RT-PCR及Western blotting结果显示1μg/ml的LPS作用48h可最大程度激活TLR4-MyD88炎症通路下游因子基因和蛋白表达. 结论:1μg/ml的LPS干预HCASMC48h可保证HCASMC处于持续的高炎性活化状态,可作为热毒生风型络风内动细胞模型的最佳造模条件.
动脉粥样硬化 人冠状动脉平滑肌细胞 热毒生风 络风内动学说 脂多糖 炎症通路
王显 李红梅
北京中医药大学东直门医院,北京中医药大学心血管病研究所,北京市东城区海运仓5号,100700
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274-283
2016-11-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）