会议专题

甘蔗内生固氮菌Klebsiella variicola DX120E nifD 基因的克隆、原核表达及纯化

基于NCBI数据库中固氮菌nifD基因的核苷酸序列,设计并合成特异性引物,以甘蔗内生固氮菌Klebsiella variicola DX120E为模板,通过PCR方法获得了Klebsiella variicola DX120E nifD基因的ORF;以pET30a(+)为原核表达载体,构建重组表达质粒pET30a-nifD.将正确的重组质粒转入原核表达菌株BL21(DE3),在28℃培养条件下经1mmol/L的异丙基硫代半乳糖苷(isopro-ply-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达;通过SDS-PAGE电泳检测融合蛋白表达情况.结果表明,本研究克隆得到甘蔗内生固氮菌Klebsiella variicola DX120E nifD基因的ORF为1452bp,编码483个氨基酸;原核诱导表达后经提纯和质谱鉴定,该蛋白等电点为5.90,分子量为53.87kD,与预期大小一致.该蛋白在原核表达系统中以包涵体的形式成功表达.利用Ni柱亲和层析方法进一步获得了纯度较高的重组蛋白,为今后单克隆抗体的制备、蛋白质印记杂交检测(Western Bloting)等研究奠定了基础.

甘蔗 固氮菌 基因克隆 原核表达 蛋白纯化

张琨琨 邵敏 吴朝兴 杨丽涛 李杨瑞 邢永秀

广西大学农学院,广西大学亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室,南宁,530004 广西大学农学院,广西大学亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室,南宁,530004;中国农业科学院甘蔗研究中心,广西农业科学 院农业部广西甘蔗生物技术与遗传改良重点实验室,广西甘蔗遗传改良重点实验

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广西甘蔗学会第十届代表大会暨2015年学术交流会

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2015-09-06(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)