护心方对氧化低密度脂蛋白诱导的THP-1源性泡沫细胞自噬的影响
目的:观察护心方对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的泡沫细胞自噬的影响,以评估其在抗动脉粥样硬化方面的作用. 方法:160nmol/L PMA孵育THP-1细胞24h后诱导分化成巨噬细胞,加入50mg/L ox-LDL培养48h,使其转化为泡沫细胞.以护心方含药血清作用48h.分别于施加干预因素后0h、0.5h、1h、2h、4h、6h、12h、24h、48h时PBS洗脱,收集各组细胞.采用蛋白质印迹检测微管相关蛋白轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)、微管相关蛋白轻链3Ⅰ(LC3Ⅰ)、Beclin以及p62的表达;激光共聚焦显微镜观察自噬蛋白指标LC3B(LC3Ⅱ)在细胞内分布及含量. 结果:经ox-LDL诱导的泡沫细胞中油红0显示有大量脂质颗粒存在,自噬相关蛋白指标中LC-3Ⅱ/Ⅰ和Beclin-1表达显著高于空白对照组(均P＜0.001),p62的表达显著低于空白对照组(P＜0.05);而护心方干预组可使LC-3Ⅱ/Ⅰ和Beclin-i表达显著降低(P＜0.05,P＜0.001),p62的表达显著升高(P＜0.05)相对于ox-LDL刺激组.以40％护心方含药血清处理细胞,细胞的自噬指标LC3Ⅱ/Ⅰ比例升高,时间5h时达峰(P＜0.01),随后逐渐减低,在12h时仍与对照组有显著差异(P＞0.05);p62蛋白表达水平逐渐升高,时间9h达峰(P＜0.001);而Beclin蛋白表达逐渐下降,至5h时明显低于对照组(P＜0.001).激光共聚焦显微镜观察和半定量自噬表达指标LC3B(LC3Ⅱ)的平均荧光值,经ox-LDL处理的泡沫细胞组LC3B表达较空白对照组显著增加(P＜0.001);护心方干预后则见LC3B表达显著降低(P＜0.001),并可抑制LC3B向细胞浆内周围聚集. 结论:护心方能够逆转由ox-LDL诱导的细胞自噬相关蛋白的表达,改善自噬相关蛋白在细胞内的分布情况,提示护心方具有抵抗动脉硬化过程中过度自噬的作用.
动脉粥样硬化 护心方 实验药理 氧化低密度脂蛋白 泡沫细胞 细胞自噬
江巍 李杰 阮新民
广东省中医院
国内会议
2016年第二届全国心血管及中医痰证研讨会暨世界中医药学会联合会痰证学专业委员会成立大会暨广东省中西医结合学会心律失常专业委员会学术年会
广州
中文
367-375
2016-08-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）