血清饥饿对原代人脐静脉内皮细胞周期同步化的影响
(0) 目的：探讨人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)的最佳饥饿条件,以建立高效稳定的HUVECs体外分离提取方法,并为HUVECs相关实验提供研究基础. 方法：用0.1％Ⅱ型胶原酶灌注脐静脉腔消化15min,收集细胞并用内皮细胞专用培养基(含5％内皮细胞基础培养基、1％内皮细胞生长因子、1％青链霉素),置37℃,5％CO2培养箱培养.在倒置显微镜下观察细胞形态特点,并用细胞免疫荧光方法对所得细胞进行鉴定.用流式细胞术检测所得HUVECs的纯度,并检测0％、0.1％、0.5％、1％血清浓度的培养基饥饿处理0、6、12、18、24h对细胞周期的影响. 结果：0.1％Ⅱ型胶原酶消化可以得到HUVECs,细胞培养呈典型的铺卵石状排列,细胞较密处呈涡旋状排列.免疫荧光检测细胞VIII因子相关抗原表达呈阳性.流式检测细胞纯度高达99.67％.不同血清浓度培养基培养6h可获得70％左右的G0/G1期细胞;培养12h可获得80％～90％的G0/G1期细胞;培养18、24h可获得95％左右的G0/G1期细胞. 结论：0.1％Ⅱ型胶原酶充盈静脉管腔可以获得高纯度的原代HUVECs.完全无血清培养基培养12h即可获得纯度超过80％的G0/G1期HUVECs.
人脐静脉内皮细胞 饥饿条件 提取方法 原代培养
覃乙芯 吴卓敏 徐茜 廖文婕 贺帅 岑柏宏 廖路敏 王震 季爱民
南方医科大学珠江医院药剂科,广东 广州 510282
国内会议
广州
中文
1-4
2016-12-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）