环介导等温扩增技术与横向流动试纸条法快速检测布鲁氏杆菌的研究

摘要：

本研究建立布鲁氏杆菌LAMP-LFD检测方法，旨在将该方法应用于食品中布鲁氏杆菌的检测。将环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)与横向流动试纸条技术(Lateral flow dipstick,LFD)联合应用,建立了一种快速、便捷的布鲁氏杆菌检测方法.针对布鲁氏杆菌OMP25基因设计4条特异性引物和1条异硫氰酸荧光素(Fluorescein isothiocyanate,FITC)标记的探针.生物素标记LAMP扩增产物能够特异性地与FITC标记的探针杂交,杂交产物经LFD检测.优化后的扩增温度和时间为63℃反应50min,加上样品的前处理,完成检测仅需80min.LAMP-LFD方法可特异性地检出布鲁氏杆菌,其最低检测限为5.4×100CFU/mL,是利用外引物建立的PCR方法的100倍.试验结果表明,本研究建立的LAMP-LFD方法能够快速、特异地检测布鲁氏杆菌;简单经济,不需要其他辅助仪器,结果即可直观判断;适合基层实验室、应急检测或现场监测等使用,具有较高的推广价值.

关键词： 食品检测 布鲁氏杆菌 环介导等温扩增 横向流动试纸条

作者: 李秀梅 梁智选 李颖 郭恋 王健春 赵静 王红军

作者单位: 天津市动物疫病预防控制中心,天津300402 天津市畜牧业发展服务中心,天津 300384

会议类型: 国内会议

会议名称: 第五届京津冀畜牧兽医科技创新研讨会暨北京畜牧兽医学会“瑞普杯”新思想、新观点、新方法演讲会

会议地点: 北京

会议语种:中文

页码: 13-23

在线出版日期: 2016-12-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）