miR-489靶向MyD88和Smad3减轻矽尘诱导的肺纤维化并受lncRNACHRF负调控
目的：课题组前期研究中发现小鼠矽肺纤维化组织中miR-489表达显著下调,本次主要研究上调miR-489是否能阻止矽尘诱导的肺纤维化进程,同时探讨其可能的机制. 方法：经气管一次灌注SiO2粉尘悬液方法建立小鼠矽肺模型,同时首次经气管、染尘后7、14和21d分别经尾静脉注射给予miR-489agomir建立染尘小鼠miR-489上调模型,28d后分析肺组织病理改变、纤维化标志物、lncRNA CHRF、miR-489及其靶基因(MyD88、Smad3)水平.细胞水平采用RT-PCR、Western blot、免疫荧光等方法测定SiO2处理小鼠巨噬细胞(RAW264.7)、TGF-β1处理小鼠成纤维细胞(NIH/3T3)中lncRNA CHRF、miR-489、靶基因以及炎症和纤维化标志物表达;采用lncRNA过表达质粒、siRNA和miRNA mimic转染等方法构建过/低表达lncRNA CHRF细胞系及过表达miR-489细胞系观察miR-489与靶基因、miR-489与lncRNA CHRF的调控关系. 结果：小鼠肺组织中miR-489在矽尘处理后7、14和28天均出现显著下调(P<0.01).在SiO2处理RAW264.7和TGF-β1处理NIH/3T3中miR-489表达也下调.上调小鼠体内miR-489组肺纤维化损伤的严重程度(1.25±0.89)和分布范围(0.75±0.46)分别低于矽尘+miR-NC组严重程度(3.13±1.81)和分布范围(2.38±1.06),并且肺组织中炎症和纤维化标志物水平降低.通过文献查阅及荧光素酶报告基因实验证实MyD88和Smad3均是miR-489的靶基因.在细胞系中上调miR-489发现其主要通过抑制靶基因MyD88和Smad3阻断矽尘诱导的炎症和纤维化信号通路.此外,心肌肥厚相关因子(lncRNA CHRF)在染矽尘小鼠和细胞模型中均表达上调(P<0.01),lncRNA CHRF和miR-489共转染细胞发现lncRNA CHRF可下调miR-489表达水平,解除miR-489对靶基因MyD88和Smad3的抑制,从而激活炎症和纤维化信号通路,促使矽尘诱导的肺纤维化发生. 结论：本研究阐明在矽尘诱导的肺纤维化中lncRNA CHRF-miR-489-MyD88、Smad3信号通路发挥关键作用,这为矽肺病的分子生物学诊断及新的治疗靶点研究提供理论依据和线索.
矽肺 肺纤维化 小分子RNA-489 免疫机制
吴秋云 韩磊 严玮文 吉晓明 韩如慧 杨京津 袁佳俐 倪春辉
南京医科大学,公共卫生学院,劳动卫生与环境卫生学系,教育部毒理学重点实验室,南京,211166 江苏省疾病预防控制中心,职业病防治所,南京,210028
国内会议
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1-13
2016-08-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）