转运蛋白基因glpT和uhpT在金黄色葡萄球菌耐磷霉素机制中的研究

摘要：

目的：为了解金黄色葡萄球菌中转运蛋白基因介导磷霉素耐药的作用。 方法：采用基因敲除与回补、实时荧光定量PCR及生长曲线等方法，分析转运蛋白基因变异与表达差异在磷霉素耐药性形成中作用。 结果：MRSA临床分离株SA1170经测序证实为uhpT单转运蛋白基因变异，导入pRB473-uhpT质粒后，磷霉素MIC从256μg/ml降至16μg/ml，导入pRB473-glpT质粒后，磷霉素MIC未变化。荧光定量PCR结果显示，除SA1170的uhpT及glpT水平较磷霉素敏感株下调约4倍。MRSA临床分离株SA1391经测序证实为glpT单转运蛋白基因变异，导入pRB473-uhpT质粒后，磷霉素MIC从128μg/ml降至64μg/ml，导入pRB473-glpT质粒后，磷霉素MIC从128μg/ml将至32μg/ml。荧光定量PCR结果显示，uhpT及glpT水平较磷霉素敏感株无明显差异。转运蛋白基因敲除后，磷霉素抑菌圈较原始菌株明显缩小。E-test测试结果示金葡菌Newman磷霉素MIC为0.5μg/ml，glpT基因敲除株Newman-△glpT磷霉素MIC为4μg/ml，uhpT基因敲除株Newman-△uhpT磷霉素MIC为32μg/ml，uhpT/glpT双基因敲除株Newman-△uhpT／glpT磷霉素MIC＞1024μg/ml。敲除株导入源自ATCC25923菌株转运蛋白基因的回补质粒后，纸片法药敏磷霉素抑菌圈出现扩大，E-test测试结果显示Newman-△uhpT导入pRB473-uhpT质粒后，磷霉素MIC从32μg/ml降至0.5μg/ml；Newman-△glpT导入pRB473-glpT质粒后，磷霉素MIC从4μg/ml降至0.25μg/ml；MRSA临床分离株SA0402经测序证实为双转运蛋白基因变异，导入pRB473-uhpT质粒后，磷霉素MIC从＞1024μg/ml降至16μg/ml，导入pRB473-glpT质粒后，磷霉素MIC未见变化。敲除株与原始株在生长曲线上无显著差异。 结论：本研究证实转运蛋白基因参与金葡菌对磷霉素耐药。临床株除通过转运蛋白基因变异影响其对磷霉素的耐药水平外，转运蛋白表达下调同样可能介导磷霉素耐药水平上升。

关键词： 金黄色葡萄球菌 转运蛋白 基因变异 磷霉素 耐药性

作者: 徐溯 傅祝英杰 郭燕 刘杨 徐晓刚

作者单位: 复旦大学附属华山医院 200040

会议类型: 国内会议

会议名称: 中国医药教育协会感染疾病专业委员会第二届学术大会、第八届全国侵袭性真菌病实验室诊断及临床治疗新进展研讨会暨2016中国药学会药物临床评价研究专业委员会年会

会议地点: 上海

会议语种:中文

页码: 338-338

在线出版日期: 2016-07-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）