梅花鹿-牛异种体细胞核移植操作方法的研究
本研究旨在对梅花鹿-牛异种体细胞核移植(Interspecies Somatic Cell Nuclear Transfer,ISCNT)的显微操作方法进行系统研究,从而优化其操作过程.以梅花鹿耳皮肤成纤维细胞为供核细胞,牛MⅡ期卵母细胞为受体,分别采用盲吸法、挤压法和脱羰秋水仙碱(Demecoline,DEME)化学辅助的方法去核,带下注射(Perivitelline Microinjection,PM)、Pizeo破膜细胞胞质内注射(Break-Membrane-Cell Intracytoplasmic Microinjection,BMCIM)和全细胞胞质内注射(Whole-Cell Intracytoplasmic Microinjection,WCIM)的方法注核,带下注核的卵母细胞电融合后化学激活,其余方法注核后直接化学激活,重组胚用CR1aa培养液体外培养.结果表明:(1)DEME辅助法去核率最高,挤压法最低,三种去核方法的去核率差异显著(P＜0.05),去核时间差异不显著(P>0.05);(2)PM组和WCIM组注核成功率分别为100％和94.8％,注核时间分别为31.0s和35.1s,显著低于BMCIM法(P＜0.05),但是注核成功率显著高于BMCIM法(P<0.05),而且两者差异不显著(P>0.05);(3)BMCIM组和WCIM组的激活率均显著高于PM组(P<0.05),其中一步法的BMCIM组最高,一步法和两步法在激活率、卵裂率和囊胚率方面均无显著差异(P＞0.05).结果提示:DEME辅助去核、Pizeo辅助破膜胞质内注射的一步法显微操作可有效用于梅花鹿-牛的异种体细胞核移植的研究.
异种体细胞核移植 显微操作 去核技术 注核技术
王士勇 郑军军 杨月春 刘宗岳 于淼 杨福合
中国农业科学院特产研究所,长春 130112 吉林农业科技学院动物科学学院,吉林 132101
国内会议
长春
中文
499-506
2016-07-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）