Sortase A介导的(S)-羰基还原酶寡聚体高效立体选择性转化(S)-苯基乙二醇
(0) 目的：来源于近平滑假丝酵母CCTCC M203011的(S)-羰基还原酶Ⅱ(SCRⅡ)能够催化2-羟基苯乙酮转化为(S)-苯基乙二醇,但效率却不尽人意.Sortase作为一种“分子订书机”可以将蛋白质进行定点连接,连接后的蛋白质功能得到了加强.本次研究中,将金黄色葡萄球菌中的sortase A构建SCRⅡ寡聚体,通过在其C端添加GGGGSLPETGG序列,以其N端存在的Gly作为亲核试剂,在sortase A的介导下进行连接反应,经过条件优化后,几乎所有的SCRⅡ单体都被连接成二聚体或三聚体,得到的这些SCRⅡ寡聚体相比于原始酶SCRⅡ在催化2-HAP时活性提高了6倍,催化效率提高了4倍,并且在pH5.0-9.0和10℃-50℃的范围里更加稳定.生物转化结果显示,SCRⅡ寡聚体能够在3小时内将2-HAP(5g/L)完全还原为(S)-PED,且光学纯度为100％,相比于E.coli-SCRⅡ,SCRⅡ寡聚体将转化时间缩短了16倍.本次研究首次将sortase A应用于氧化还原酶的连接,并显著提高了SCRⅡ的催化效率和热稳定性,表明sortase在手性催化中有很大的潜在应用价值.
(S)-羰基还原酶Ⅱ 制备工艺 催化效率 热稳定性
李坤鹏 张荣珍 徐岩
江南大学生物工程学院,教育部工业生物技术重点实验室,江苏无锡214122
国内会议
哈尔滨
中文
1-10
2016-08-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）