人源抗CD147单链抗体的筛选及其完整抗体表达载体的构建
噬菌体展示技术将人抗体基因克隆到噬菌体载体中,利用其表面呈现的特点可以方便地用不同的抗原筛选出相应的人源抗体,为人单抗的制备提供了有效手段.2003年随着雅培公司运用噬菌体呈现技术获得的治疗风湿性关节炎的全人源抗体Humira进入市场,噬菌体抗体库已成为人源抗体制备的重要平台.选择其中结合活性较强的3株克隆进行序列测定，在对其序列进行分析的基础上分别设计3对其重链可变区（VH）及轻链可变区（Vκ）的上下游引物，PCR扩增后经1.2％琼脂糖凝胶电泳回收大小约为300~400bp条带，利用同源重组技术将3对VH及Vκ拼接至分别包含有人κ链及IgG1恒定区的真核表达载体pCMV/R-L与pCMV/R-H上，将重组产物（3对完整轻重链）分别转化DH5α感受态菌，铺盘过夜培养后从各培养盘中挑取3个单克隆，通过菌液PCR鉴定转化后阳性率并对阳性克隆进行测序，最终成功将抗体库来源的抗CD147单链抗体转化成完整的人IgG1，为进一步在真核细胞中的表达及后期抗体功能的评价打下了基础。
人源抗CD147单链抗体 筛选方法 抗体表达载体
王欲晓 刘妍 丁立 吴成林 付凯飞 周丽君
海军总医院中心实验科,北京,100048 海军总医院中心实验科,北京,100048;南方医科大学第三临床医学院,广州 510630
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2016-08-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）