快速鉴别兔出血症病毒经典毒株和变异毒株RT-PCR方法的建立
本研究旨在建立鉴别兔出血症病毒经典毒株和变异毒株的RT-PCR检测方法,根据GenBank中经典RHDV和RHDV2的VP60基因序列,设计两对分别结合两种基因的特异性引物.利用两对引物,以人工合成RHDV2VP60基因构建的pMD19-T-VP60-2和本实验室保存含经典RHDVVP60基因的pMD19-T-VP60为模板,进行反应条件的优化、敏感性试验、特异性试验以及RHDV人工感染样品和疑似临床样品的检测.结果显示,该方法具有良好的特异性和敏感性;经典RHDV和RHDV2的检测限度分别为95和76个拷贝的靶基因片段,且支气管败血波氏杆菌、多杀性巴氏杆菌、产气荚膜梭菌、大肠杆菌等病原以及重组质粒pMD19-T-EBHSV的检测结果均为阴性;RHDV人工感染的组织样品检出率为100％;检测临床样品15份,其中3份为经典RHDV阳性,其他样品均为经典RHDV及RHDV2阴性.该方法的建立能够实现快速、特异及敏感地检测RHDV和RHDV2,为监测RHDV变异株的流行情况提供技术支撑.
兔出血症 经典毒株 变异毒株 鉴别诊断 RT-PCR检测
宋艳华 魏后军 范志宇 左园园 胡波 仇汝龙 陈萌萌 李明勇 薛家宾 徐为中 王芳
江苏省农业科学院兽医研究所·农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室·国家兽用生物制品工程技术研究中心,南京 210014 山东青岛康大欧洲兔业育种有限公司,青岛 266400
国内会议
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240-247
2016-11-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）