嗜吞噬细胞无浆体 SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立及应用

摘要：

嗜吞噬细胞无浆体(Anaplasma phagocytophilum,AP)隶属立克次体目、无浆体科、无浆体属,是主要经蜱传播、专性细胞内寄生的人兽共患病病原体,严重威胁人和动物健康.目前AP的检测主要有形态学、分子生物学方法、血清学检查和PCR、LAMP技术等,但均存在一定的局限性.本研究旨在建立AP SYBR Green I荧光定量PCR检测方法,并对该方法进行评价分析,以期为AP病原检测和定量分析病原感染程度奠定基础.本研究成功建立了A. phagocytophilum荧光定量PCR检测方法，与何德肆等建立的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测边缘无浆体敏感性相当（1×102 copies /μL）；组内与组间试验的变异系数均小于2 ％。表明本试验所建立的荧光定量PCR方法具有特异性强、敏感性较高、稳定性较好等优点。目前，常用的荧光定量PCR定量方法主要包括TaqMan探针法和SYBR Green染料法。与TaqMan探针法相比较，SYBR Green 染料法简便易用，灵敏性高，且省去了探针制作的成本，已经广泛用于细菌、真菌和病毒检测中。本试验建立的荧光定量PCR方法对30份临床样品检测，A. phagocytophilum阳性检出率比巢式PCR 法高16.67 %，与张晶波等用TaqMan探针法建立的荧光定量PCR检测A. phagocytophilum相比，更节约成本。

关键词： 人兽共患病病原体 嗜吞噬细胞无浆体 荧光检测 聚合酶链式反应

作者: 崔艳艳 王晓星 张艳 史柯 菅复春 张龙现 王荣军 宁长申

作者单位: 河南农业大学牧医工程学院,河南 郑州 450002

会议类型: 国内会议

会议名称: 2017年全国养羊生产与学术研讨会暨养羊学分会第七次全国会员代表大会

会议地点: 石家庄

会议语种:中文

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在线出版日期: 2017-08-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）