效应因子AVR-Pia、AVR1-CO39及其结合区域RATX1的重组表达、纯化和晶体生长
由稻瘟病菌引起的稻瘟病严重危害水稻的产量和品质安全.水稻与稻瘟病菌之间的互作符合”基因对基因”假说.目前,水稻的23个抗病基因和稻瘟病菌的9个无毒基因已经被克隆.已有的研究结果表明,水稻抗病蛋白Pia可以识别稻瘟菌两个非同源的效应因子AVR-Pia、AVR-CO39触发水稻的ETI反应从而引发水稻的过敏性坏死反应.Pia由一对NLR蛋白RGA5、RGA4组成,RGA5-A作为RGA5的功能转录本,其C端RATX1金属离子结合结构域直接与效应因子相互作用以识别这两种效应因子.本研究作者利用大肠杆菌表达系统将Pia的截短体RGA5A_S(RATX1)分别与无毒基因AVR-Pia、AVR1-CO39进行重组表达,纯化以及晶体生长.为了获得高表达、高质量的目的蛋白,通过比较不同载体和表达菌株组合在不同诱导条件下目标蛋白的表达量,从中获得较优的表达诱导条件；在此基础上,利用不同层析技术、优化纯化条件如缓冲液,添加剂等因素,建立了以上两个串联重组表达蛋白的最优纯化流程.采用气相扩散法筛选和优化晶体生长条件,初步获得复合物RGASA-AVR-Pia的微晶,有待进一步优化获得理想的可用晶体.本研究结果以期为分析具有RATX1结构域的R蛋白Pia如何识别效应因子激发防卫反应提供依据,进一步为持久抗病性的作物选育提供新的材料和理论基础.
稻瘟病菌 抗病蛋白 效应因子 蛋白纯化
张轶琨 郭力维 刘强 彭友良 刘俊峰
中国农业大学农学与生物技术学院植物病理学系,北京100193
国内会议
泰安
中文
98-98
2015-10-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）