柑橘上两种检疫性疫霉的三重PCR分子检测
冬生疫霉(Phytophthora hibernalis)和丁香疫霉(Phytophthora syringae)是柑橘属植株上寄生的两种重要检疫性真菌病害.针对两种致病菌,目前国内外已有形态学鉴定和危害的研究报道以及冬生疫霉病菌的ITS序列分析和RFLP初步研究,但未见有两种病原菌的同步分子检测的报道.本研究首先通过培养,观察比较了两种病原菌的菌落和形态特征.发现前者菌落呈玫瑰花瓣状,孢子囊呈长卵圆形或椭圆形,分生孢子为卵圆形；后者菌落呈菊花花瓣状,孢子囊呈宽卵圆形或倒梨形至椭圆形,分生孢子为单胞肾形.通过比对GenBank上公布的柑橘属水果上15株疫霉菌的18S rDNA基因序列、ITS序列、heat shock protein基因序列分别设计了疫霉的通用引物18SF/18SR、冬生疫霉的特异性引物GPHF/GPHR和丁香疫霉特异性引物GPSF/GPSR.在同一PCR管中3组引物(18SF/18SR、GPHF/GPHR和GPSF/GPSR)经优化体系后,18SF/18SR扩增序列作为所有菌株菌丝基因组DNA提取模板的质量监控,针对冬生疫霉和丁香疫霉病菌单一模板的18S区域、ITS区域和heat shock protein区域同时进行三重PCR扩增.利用此方法检测,冬生疫霉病菌出现884 bp的18S保守区扩增片段和232 bp的ITS基因的特异扩增带,丁香疫霉病菌出现884 bp的18S保守区扩增片段和683 bp的heat shock protein基因特异扩增带.所有菌株均未见非特异性片段的干扰.此三重PCR检测体系的建立为此两种检疫性真菌病害的同步分子检测提供了特异方法.
冬生疫霉 丁香疫霉 检疫性真菌 三重PCR 特异分子检测
廖芳 刘跃庭 戴世泰 罗加凤
天津出入境检验检疫局,天津300461
国内会议
泰安
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104-104
2015-10-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）