一种新的遗传性凝血因子XIII缺乏症凝血因子XIIIA亚基mRNA大片段缺失的分子机制研究

摘要：

目的:研究遗传性凝血因子XIII(FXIII)缺乏症FXIII A亚基mRNA DelCD11-279大片段缺失的分子致病机制. 方法:构建正常人、先证者母亲FXIII.A亚基mRNA表达质粒(pET-22b(+)/FXIIIA)和先证者FXIIIA亚基mRNA DelCD11-279大片段缺失的表达质粒(pET-22b(+)/FXIIIA-Del),转化大肠杆菌BL21,SDS-PAGE和Westemblot法检测FXIIIA蛋白质的表达,Ni-NTA树脂结合柱纯化FXIII A亚基蛋白质,EZ-LinkTM5-(Biotinamido)Pentylamine掺入法检测纯化FXIIIA亚基蛋白质活性. 结果:pET-22b(+)/FXIIIA和pET-22b(+)/FXIIIA-Del经酶切及PCR鉴定构建成功,转化大肠杆菌BL21,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷诱导后获特异高效表达,SDS-PAGE显示重组蛋白质的相对分子质量分别为83200和51900,用Ni-NTA树脂结合柱分离得到纯化的蛋白质,Westemblot分析表明重组的蛋白质是人FXIIIA亚基蛋白,纯化FXIIIA亚基蛋白质活性测定:先证者母亲和先证者纯化蛋白质活性分别为正常人纯化FXIIIA蛋白质活性的95.87％和0.00％. 结论:FXIIIA亚基mRNA DelCD11-279大片段缺失导致编码一条截短的464个氨基酸的无活性FXIIIA亚基蛋白是先证者遗传性FXIII缺乏症的分子机制之一.

关键词： 遗传性凝血因子缺乏症 致病机制 基因突变 原核表达

作者: 马秋玲 金洁 蔡望伟

作者单位: 杭州310003,杭州浙江大学医学院附属第一医院血液科;河南中医学院第二附属医院血液科,450002 杭州310003,杭州浙江大学医学院附属第一医院血液科 海南医学院生物化学教研室

会议类型: 国内会议

会议名称: 河南省中医、中西医结合学会血液病分会第二届第二次学术会议暨肿瘤生物免疫治疗新进展学术会

会议地点: 郑州

会议语种:中文

页码: 132-137

在线出版日期: 2015-12-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）