玉米赤霉烯酮降解酶基因zhd101表达载体构建及在大肠杆菌中表达
本试验通过将玉米赤霉烯酮降解酶基因zhd101基因在大肠杆菌中的表达,以获得大量纯化的重组ZHD101降解酶蛋白.通过人工合成zhd101基因,以质粒pET32a(+)为表达载体,构建zhd101重组质粒,并通过酶切和测序鉴定重组质粒.然后化学转化大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG诱导转化子,通过SDS-PAGE电泳鉴定zhd101表达水平,采用Novagen公司生产的His.Bind蛋白纯化试剂盒纯化ZHD101蛋白.结果表明,重组质粒pET32a(+)-zhde101经HindⅢ、SacⅠ酶切后,1％琼脂糖凝胶电泳证实zhd101正确插入pET32a(+)载体.重组菌经IPTG诱导后,有分子量大约为47.5KD蛋白表达,与预期的融合蛋白分子量相符,蛋白表达量约占细菌总蛋白量的35％,纯化后的ZHD101蛋白样品经SDS-PAGE和光密度扫描分析表明其纯度约为95％左右.成功构建的pET32a(+)-zhd101表达载体能在大肠杆菌BL21(ED3)获得高效表达,大量纯化的ZHD101蛋白为进一步研究和应用奠定了基础.
环境污染 玉米赤霉烯酮 降解酶 zhd101基因 大肠杆菌 基因表达
龙淼 刘义 何润霞 陈新亮 高增贵
沈阳农业大学畜牧兽医学院,辽宁沈阳 110866 四川理工学院化学与制药工程学院,四川 自贡 643000 沈阳农业大学植物保护学院,辽宁沈阳 110866
国内会议
沈阳
中文
88-91
2015-10-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）