体外转染Klotho基因对原代成骨细胞活性的影响
目的:骨质疏松症(Osteoporosis，oP)是以骨吸收大于骨生成且极易发生骨折的全身性骨骼疾病，伴有骨的脆性增加吲。随着社会入口老龄化，骨质疏松症发生率明显增高，已成为影响老年人生活质量、导致社会家庭负担增加的常见疾病之一。本实验通过提取原代大鼠骨髓问充质干细胞(BMSCs)并向成骨方向诱导分化，茜素红染色结果表明诱导成功，为后续实验成骨细胞的来源做好了铺垫。探讨转染克老素(klotho,KL)基因对成骨细胞(osteoblast)活性的影响,揭示KL经FGF23(成纤维生长因子23)信号通路对骨代谢调节的分子机制. 方法:提取原代骨髓间充质干细胞(BMSCs)并培养,用倒置显微镜观察BMSCs形态.BMSCs培养至第三代时做流式鉴定,之后换为诱导培养基培养14-21天,诱导为成骨细胞,用茜素红染色鉴定是否诱导成功.通过rAAV(重组腺相关病毒)介导小鼠Klotho基因转染成骨细胞.实验分为五组:空白对照组(control组),klotho转染组(KL组),klotho转染+FGFR1抑制剂(BGJ398)组(KL+ BGJ398组),空载体组(rAAV组)空载体+FGFR1抑制剂(BGJ398)组(rAAV+BGJ398组).分组处理72小时后,荧光倒置显微镜观察成骨细胞腺病毒表达情况,RT-PCR检测成骨细胞的KL mRNA的表达,ELISA检测上清液KL蛋白的含量;RT-PCR检测成骨细胞分泌物:骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)的mRNA表达. 结果:成功提取原代骨髓间充质干细胞,并且成功向成骨方向诱导.通过rAAV转染KL后,成骨细胞高表达外源性KL蛋白(p＜0.01),并在KL-FGF23-FGFR1通路正常的情况下可显著促进成骨细胞分泌OCN (p＜0.05),显著抑制成骨细胞分泌OPN(p＜0.05). 结论:KL可以促进成骨细胞的活力,可能是通过KL-FGF23-FGFR1通路发挥作用.
骨质疏松 成骨细胞 克老素基因 克老素蛋白 成纤维生长因子23 骨代谢调节
杨秋晨 马厚勋 李运奎 邓小琴 唐芸 吴平
重庆医科大学附属第一医院老年病科,重庆400016
国内会议
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6-16
2015-09-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）