人呼吸道合胞病毒截短F1蛋白的表达及免疫原性评价
目的:克隆重组RSV A型Long株人呼吸道合胞病毒(HRSV)截短F1融合性蛋白,并评价其免疫原性. 方法:采用RT-PCR方法克隆RSV F1截短蛋白序列,克隆至pET28质粒表达载体,构建重组原核表达质粒,转化大肠杆菌Shuffle T7菌株,IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blots鉴定后,用Ni亲和层析柱进行纯化.重组蛋白免疫ICR小鼠,用ELISA方法检测血清抗体效价,进行其免疫原性评价. 结果:重组的原核表达质粒经双酶切及测序证明构建成功;表达的F1融合性蛋白片段大小1104bp,表达的蛋白大约368个氨基酸,其相对分子量为44KDa.表达的F1融合性蛋白以包涵体形式存在,纯化后蛋白纯度达90％.重组F1蛋白免疫小鼠效价最高可达1:4096. 结论:原核表达的重组RSV F1蛋白免疫原性好,为单克隆抗体的制备及检测试剂盒的研究奠定基础.
人呼吸道合胞病毒 F1融合性蛋白 基因表达 免疫原性
李华 杨婷 岳磊 何晓娟 朱凡丽 谢天宏 龙润乡 杨蓉 罗芳宇 谢忠平
中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所 云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心 云南省重大传染病疫苗研发重点实验室,昆明650118
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191-196
2015-11-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）