代谢工程构建重组耶氏解脂酵母生产中长链聚羟基脂肪酸酯
中长链聚羟基脂肪酸酯(mcl-PHA)是一大类由微生物合成的天然生物聚酯,因具有可再生性和生物降解性愈来愈受到人们的关注.Mcl-PHA可由一些假单胞菌利用自身的脂肪酸合成途径或β-氧化途径来合成.耶氏解脂酵母具有很好的脂/脂肪酸分解代谢能力,但是它体内缺乏PHA合成酶(intrinsic)不能合成mcl-PHA.本文采用代谢工程策略构建重组解脂酵母,外源表达来自铜绿假单胞菌PAO1(P.aeruginosa PAO1)的PHA合成酶基因PhaC1.在PhaC1基因的末端添加PTS1过氧化物酶体定位信号序列,使其在过氧化物酶体内发挥功能.利用pINA1312载体构建表达框,借助载体上的zeta序列元件将PhaC1基因表达框整合至酵母基因组,完成基因的稳定表达.重组菌PSOC在葡萄糖为唯一碳源的培养基中几乎不产PHA,添加0.5％的油酸时可合成占细胞干重0.67％的mcl-PHA.在含三油酸甘油酯的培养基中发酵72h产生1.51％PHA.本实验表明解脂酵母成为有潜力的生产细胞工厂,在将来可以利用一些食品厨余垃圾等富含油脂的廉价资源生产mcl-PHA.
中长链聚羟基脂肪酸酯 生产工艺 重组耶氏解脂酵母 PHA合成酶 代谢工程
高翠娟 连思琪 祁庆生
临沂大学 生命科学学院,山东 临沂 276000;香港城市大学 环境工程学院,香港 999077;山东大学 微生物技术国家重点实验室,山东 济南 250100 香港城市大学 环境工程学院,香港 999077 山东大学 微生物技术国家重点实验室,山东 济南 250100
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2015-11-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）