类志贺邻单胞菌噬菌体ФP4-7裂解酶gp2基因的表达及活性测定
由于水产养殖方式不断趋于高密度、产业化和集约化,在提高水产品产量的同时,水体中过多的营养成分也造成了病原菌的大量繁殖.加之抗生素的滥用,多重耐药菌株不断出现,细菌性传染病给水产养殖也带来了巨大损失,严重威胁了人类的食品安全.本实验以水产致病菌类志贺邻单胞菌（Plesiomonas shigelloides）噬菌体ФP4-7的基因组DNA作为模版，采用PCR技术扩增裂解酶gp2基因，并将其克隆至质粒pQE30上，转化E.coli M15/pREP4。在0.5 mmol/L IPTG和16oC条件下诱导工程菌株表达16 h，超声破碎菌体细胞，收集含有融合蛋白的上清液，采用Ni2+-NTA进行亲和层析纯化。为了分析重组裂解酶活性，用氯仿饱和的0.05 mol/L Tris-HCl（pH 7.6）缓冲液，处理对数期中期的铜绿假单胞菌PAK细胞，去除细胞外膜，作为反应底物。结果表明，成功表达的裂解酶Gp2为可溶性蛋白，分子量为18 kDa左右。通过SDS-PAGE电泳分析，亲和层析纯化的裂解酶纯度在90％以上。在1 μg/mL的浓度下，2 h内能够裂解80%铜绿假单胞菌原生质体。重组裂解酶Gp2具有较高的杀菌活性，为应用于养殖过程中病原菌感染的预防和控制奠定了基础。
水产养殖 类志贺邻单胞菌噬菌体 ФP4-7裂解酶 gp2基因 杀菌活性
何洋 荆兆元 杨洪江
工业微生物教育部重点实验室 天津市工业微生物重点实验室 天津科技大学生物工程学院 天津 300457
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1-1
2015-11-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）