铜绿假单胞菌噬菌体裂解酶表达及活性测定
铜绿假单胞菌是引起院内感染的重要条件致病菌之一,随着抗生素的滥用,铜绿假单胞菌耐药菌株、多重耐药菌株、泛耐药菌株不断出现,给临床治疗带来了困难.噬菌体(bacteriophage)及其裂解酶均具有快速杀灭特定病原菌的能力,两者相比,噬菌体存在一定局限性而裂解酶具有更重要的潜在应用价值.与革兰氏阳性菌相比,革兰氏阴性菌具有致密的外膜,限制了裂解酶对肽聚糖的降解,因此,目前大多数研究为革兰氏阳性菌噬菌体裂解酶,对于革兰氏阴性菌噬菌体裂解酶的研究相对很少.本实验克隆表达了铜绿假单胞菌噬菌体裂解酶,并对其裂解活性进行了检测。为了测定裂解酶Gp57的活性，利用考马斯蓝法（Bradford法）测定蛋白含量，蛋白含量为1.0 mg/mL，利用氯仿饱和的0.05 mol/L Tris缓冲液（pH=7.7）处理铜绿假单胞菌细胞，获得原生质体作为反应底物。加入0.5 mmol/L重组裂解酶Gp57，处理1 h后，底物原生质体细胞OD600降低了32.9％，处理2 h后底物原生质体细胞OD600降低了59.7%，结果显示，该裂解酶具有较强的裂解细菌能力。
铜绿假单胞菌噬菌体裂解酶 蛋白表达 革兰氏阴性菌 裂解活性 考马斯亮蓝法
荆兆元 何洋 杨洪江
工业微生物教育部重点实验室 天津市工业微生物重点实验室 天津科技大学生物工程学院 天津 300457
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2015-11-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）