埃可病毒6型表面特异性抗原的表达及其多克隆抗体的制备
目的：在原核细胞中表达埃可病毒6型的表面蛋白VP1,制备其多克隆抗体. 方法：筛选VP1抗原表位富集区,优化基因序列,分别克隆至质粒pGEX-4T-2和pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pGEX-4T-2-vp1和pET-28a-vp1,分别转化大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,分别用High Affinity GST-NTA resin和High Affinity Ni-NTA resin进行纯化.以纯化后的VP1-His融合蛋白为抗原免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,以VP1-GST融合蛋白为检测抗原,采用间接ELISA法检测血清效价,Western blot法检测特异性. 结果：经双酶切及测序鉴定,证明质粒pGEX-4T-2-vp1和pET-28a-vp1构建正确;在相对分子质量约39000和20000处,分别可见VP1-GST和VP1-His融合蛋白的表达,表达量分别约占菌体总蛋白的25％和30％,发现VP1-GST为可溶性蛋白,而VP1-His主要以包涵体的形式存在,需对VP1-His蛋白进行透析复性,纯度均在90％以上;免疫新西兰大白兔后获得高效价的特异性兔抗血清. 结论：两种标签的融合蛋白均具有良好的免疫原性和抗原性,所制备的多克隆抗体具有较好的特异性,为埃可病毒检测方法的建立奠定了基础.
多克隆抗体 制备工艺 埃可病毒6型 VP1抗原 蛋白表达
李素梅 齐永 徐亭亭 潘英 李素芹 李佳萌 陈晨 王新国 徐艺菲 李越希
南京军区军事医学研究所,江苏南京210002;南京医科大学基础医学院,江苏南京210029 南京军区军事医学研究所,江苏南京210002 南京军区军事医学研究所,江苏南京210002;中国药科大学生命科学与技术学院,江苏南京210009
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2015-11-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）