抑制CYP4A11基因表达的siRNA优选及应用
目的：通过基因沉默技术来抑制体内活性物质花生四烯酸(AA)的代谢酶CYP4A11的表达,并考察其表达被抑制后其是否会产生对于多个血压相关蛋白的显著影响. 方法：采用在线设计多个小分子RNA并进行Blasting进行验证,转染至EA.hy926细胞株通过荧光与QPCR来检测最有效的序列及最适宜的浓度,随后再采用表达量更高些MG63细胞系进行QPCR与WesteRn blotting的验证,选择后再通过QPCR与WesteRn blotting测定来考察CYP4A11抑制后可能对高血压相关因子的影响.所有实验数据采用t检验来统计. 结果：通过在线设计与验证后得到3对小分子RNA的序列,然后用不同浓度通过EA.hy926与MG63细胞系进行转染后经过荧光检测以及mRNA与蛋白表达检测发现25nM的siRNA-2小分子的抑制效果最好,之后再采用25nM的小RNA分子抑制CYP4A11在EA.hy926细胞株的表达后,通过基因、蛋白检测发现血压相关因子ET1R、AT1R表达下调(P＜0.05),而eNOS表达显著上调(P＜0.05). 结论：CYP4A11是体内代谢AA产生20-HETE的一种重要的代谢酶,流行病研究发现其与高血压病的相关性,通过多种验证设计的siRNA-2可以在EA.hy926细胞系中显著抑制CYP4A11的表达后,同时会显著影响血压相关蛋白ET1R、AT1R与eNOS的表达,其中对于ET1R、AT1R而言是有显著的下调,而对于eNOS有显著的上调功能,因此,siRNA-2有潜在的可能降低血压的作用,当然这还需要整体实验的进一步证实.
高血压 CYP羟化酶 微小RNA 蛋白表达
李晋 胡静 李健 严华成 石磊 赵树进
广州军区广州总医院药学部,广东 广州 510010;华南理工大学生物科学与工程学院,广东 广州 510006 广州军区广州总医院肾脏内科,广东 广州 510010 广州军区广州总医院药学部,广东 广州 510010
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2015-12-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）