LncRNA H19介导雌激素诱导乳腺癌细胞增殖的机制研究
目的：研究雌激素(17β-estradiol,E2)对19的诱导作用以及H19lncRNA在乳腺癌细胞和肿瘤组织中的功能意义. 方法：不同浓度的E2处理MCF-7细胞48小时,或1nM E2处理不同时间后,用real time PCR方法检测H19lncRNA表达水平.为了进一步阐明雌激素诱导H19基因表达是由ERα介导的,选用特定的siRNA ERα(200nM)或ER拮抗剂ICI182780来敲除或阻断ERα后,加用1nM E2或0.1％DMSO处理细胞48h后,real time PCR方法检测H19lncRNA表达水平,同样方法处理用细胞仪检测细胞增殖和细胞周期.此外,将MCF-7细胞转染H19表达载体(H19/pCDNA)或对照空载体(pCDNA)48小时后,应用real time PCR和MTS方法检测H19lncRNA表达水平以及活细胞数.最后,收集ER阳性(30例)和ER阴性(15例)乳腺癌组织标本,检测H19lncRNA的表达水平. 结果：E2以剂量和时间依赖方式诱导MCF-7细胞H19lncRNA表达,其中1nM E2处理细胞48h后H19lncRNA表达水平较对照处理组增加了19倍(P＜0.001).将特定的的siRNAERα(100nm)转染到MCF-7细胞敲除70％的ERα的mRNA和蛋白表达,能够完全消除E2诱导的H19表达;ICI182780能以剂量依赖的方式显著抑制E2诱导的H19表达,并且10uM的ICI182780能完全阻断E2诱导H19表达.这些结果表明E2诱导H19表达上调是由ERα所介导的.此外,采用siRNA H19和shRNA H19方法将H19分别敲除70％和55％后不仅能减少活细胞数,并且还能阻断1nM E2诱导的细胞生长和减少细胞周期S期比例;而过表达H19lncRNA能刺激MCF-7细胞增殖.最后ER阳性乳腺癌组织中H19lncRNA表达更比ER阴性乳腺癌组织高10倍多(P＜0.001). 结论：H19是雌激素依赖基因,并且在细胞存活和雌激素诱导的MCF-7细胞增殖中起关键作用,这表明H19lncRNA可作为用于乳腺癌诊断和进展的生物标志物,并且可作为乳腺癌治疗有价值的目标.
乳腺癌 细胞增殖 雌激素 H19基因 基因表达
孙红 蔡加琴
福建医科大学省立临床学院,福建省立医院药学部,福州,350001,福建
国内会议
福州
中文
1-11
2015-12-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）