独行菜磷酸甲羟戊酸激酶LaPMK基因克隆、生物信息学分析及原核表达

摘要：

目的:从独行菜中克隆萜类合成途径关键酶磷酸甲羟戊酸激酶(phosphomevalonate kinase,PMK)基因,进行序列分析和原核表达. 方法:根据独行菜转录组数据中LaPMK基因序列设计特异性引物,克隆得到LaPMK基因的开放阅读框(open reading frame,ORF),构建pET32a-LaPMK原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中用IPTG诱导表达LaPMK融合蛋白. 结果:LaPMK基因ORF全长为1518bp(Genbank注册号KT004541),编码505个氨基酸.生物信息学分析结果显示LaPMK蛋白没有跨膜区,不含信号肽,位于细胞质中,含有GHMP激酶家族特异的N末端和C末端的保守结构域.系统进化树结果显示LaPMK蛋白与芜菁的PMK蛋白具有92％的序列相似性,亲缘关系较近.构建pET32a-LaPMK原核表达载体,在大肠杆菌中成功表达LaPMK融合蛋白. 结论:克隆了LaPMK基因,建立其稳定的原核表达体系,这为LaPMK蛋白纯化、抗体的制备,进一步研究LaPMK基因在独行菜萜类合成途径中的作用奠定了基础.

关键词： 独行菜 磷酸甲羟戊酸激酶 生物合成 基因克隆 序列分析 原核表达

作者: 赵乐 马利刚 杨方方 冯卫生 郑晓珂

作者单位: 河南中医学院药学院 郑州 450046;呼吸疾病诊疗与新药研发河南省协同创新中心 郑州 450046 河南中医学院药学院 郑州 450046

会议类型: 国内会议

会议名称: 2015全国中医药生物化学与分子生物学年会

会议地点: 兰州

会议语种:中文

页码: 109-117

在线出版日期: 2015-08-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）