MLL2在弥漫大B细胞淋巴瘤细胞株LY-3中的表达和作用
目的：应用混合谱系白血病2(MLL2)抗体体外作用于弥漫大B细胞淋巴瘤细胞株LY-3以及体内作用于种植入LY-3细胞的荷瘤鼠,以探索研究MLL2抗体在弥漫大B细胞淋巴瘤中诱导细胞凋亡的作用. 方法：1RT-PCR检测LY-3细胞中存在MLL2基因表达.取LY-3细胞悬液,提取总RNA,根据反转录试剂盒具体实验步骤,使RNA反转录为cDNA,配制PCR反应体系,置于Realtime PCR仪上进行PCR扩增,然后进行琼脂糖凝胶电泳,最终应用凝胶成像系统观察结果.2MTT法检测MLL2抗体作用于LY-3细胞对细胞增殖的影响.取LY-3细胞悬液,调整细胞密度,并接种于U型96孔板,随机分为对照组及实验组.实验组向各孔中分别加入不同浓度的MLL2抗体,分别于加药后第24、48小时向各孔中加入20ulMTT溶液,继续孵育4小时,离心弃上清,每孔再分别加入150ul二甲基亚砜,置于酶标仪492nm条件下,测定各孔的吸光度值.3 MLL2抗体体内作用于种植入LY-3细胞的荷瘤鼠观察其抗肿瘤作用。本实验所用15只荷瘤鼠均为3-4周龄Balb/c雌鼠，饲养于省四院动物实验中心。首先于体外大量扩增LY-3细胞，然后于15只荷瘤鼠左腋下皮下接种瘤细胞，在接种瘤细胞第14天瘤体长到约1cm左右，排除3只成瘤效果不理想的荷瘤鼠，将其余12只编号，随机分为对照组和实验组，每组6只，实验组每隔2日于荷瘤鼠皮下注射MLL2抗体，抗体应用2周后，肉眼观察实验组荷瘤鼠的瘤体较对照组缩小，断颈处死荷瘤鼠，剥离瘤体，测量肿瘤的大小、称取瘤体重量。将瘤体组织制成单细胞悬液，采用RT-PCR及Western-blot法检测MLL2基因及蛋白表达。 结果：1．凝胶成像系统显示LY-3细胞存在MLL2基因表达。2．LY-3细胞经不同浓度ML12抗体处理24、48小时后，应用MTT法检测各标本吸光度值均有不同程度减低，MLL2抗体有抗增殖活性，能够诱导细胞凋亡。相同处理时间条件下，尤其在处理48小时后，在一定浓度范围内，随着MLL2抗体浓度增加，LY-3细胞抑制率呈现逐渐升高的趋势。3．MLL2抗体体内作用于种植入LY-3细胞的荷瘤鼠，实验组荷瘤鼠相比对照组瘤体缩小，剥离瘤体后，应用RT-PCR、Westem-blot法结果显示MLL2抗体组相比对照组，MLL2基因及蛋白表达均减低。 结论：1．LY-3细胞存在MLL2基因表达；2．在一定浓度范围内，随着MLL2抗体浓度的增加，LY-3细胞抑制率逐渐升高，MLL2抗体具有抗增殖活性；3．MLL2抗体作用于荷瘤鼠体内，能够诱导细胞凋亡，抑制肿瘤生长。
弥漫大B细胞淋巴瘤细胞株 混合谱系白血病2抗体 基因表达 细胞凋亡
张薇
河北医科大学第四医院
国内会议
第八届中国肿瘤内科大会、第三届中国肿瘤医师大会暨中国抗癌协会肿瘤临床化疗专业委员会2014年学术年会
北京
中文
607-608
2014-07-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）