EGFR基因突变检测方法学比较及影响因素分析
目的：表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂(TKIs)是针对晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的特异性靶向治疗药物,目前已明确EGFR突变是反映EGFR-TKI疗效的标志物.比较临床常用两种方法检测晚期NSCLC EGFR基因突变状态结果的差异及探讨福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)切片组织标本的不同保存方式对DNA数量及质量的影响. 方法：收集中国医学科学院肿瘤医院2010年11月至2011年8月经病理学确诊的晚期NSCLC FFPE组织切片标本150例,分别采用Scorpions ARMS法和直接测序法检测EGFR第18、19、20、21号外显子突变状态,分析两种方法检测EGFR基因突变结果的差异,对结果不一致病例收集临床治疗及生存资料并进行分析.对其中17例FFPE标本,分别提取DNA并保存于-20℃三年及FFPE标本保存三年后再提取DNA,比较两种保存方式对DNA的数量及质量的影响. 结果：150例标本中，Scorpions ARMS检测成功150例，直接测序法检测成功131例，Scorpions ARMS法检测EGFR基因突变的成功率高于直接测序法(100％ vs.87.3%，P<0.05)。两种方法检测结果比较差异无统计学意义，一致性相对较好(P>0.05，Kappa=0.738)。经第三方试剂盒验证，两种方法共有17例检测结果不一致。分析两种方法检测结果不一致且服用EGFR酪氨酸激酶抑制剂类靶向药(EGFR-TKls) 的5例患者的生存情况，1例直接测序法检测18外显子E709_T710>D缺失突变而ARMS阴性的患者总生存期(OS)为8个月，提示18外显子E709_T710>D缺失突变为不敏感突变类型；直接测序检测阴性而ARMS检测Del或L858R突变的4例患者，1例OS15个月，1例OS 33个月，余2例目前病情稳定，提示这4例患者EGFR突变状态为阳性，ARMS检测结果相对准确。直接测序法共检测到7种ARMS试剂盒未包含的突变类型，其中19外显子E746_S747>IP突变及20外显子H773同义突变为国内外均未报道过的突变类型。新鲜FFPE标本提取并贮存于-20℃三年的DNA与FFPE标本保存三年后提取的DNA，数量比较差异无统计学意义（P>0.05），但后者的质量相对较差，片段化程度更严重。 结论：Scorpions ARMS法检测FFPE组织中EGFR基因成功率高于直接测序法，而直接测序法可以检测出Scorpions ARMS试剂盒不包括的少见突变，本研究检测出的19外显子E746_S747>IP突变及20外显子H773同义突变为国内外均未报道过的突变类型，故Scorpions ARMS与直接测序法联合检测结果更为全面、可靠。对结果不确定患者，建议以临床治疗及生存资料支持诊断。此外，对于FFPE标本，将其DNA提取后低温贮存，更有利于DNA完整性的保存。
非小细胞肺癌 表皮生长因子受体 基因突变 检测方法
钱晓燕 韩晓红 王帅 沈胤晨 吴荻 张志尚 冯云 石远凯
中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院 抗肿瘤分子靶向药物临床研究北京市重点实验室
国内会议
第八届中国肿瘤内科大会、第三届中国肿瘤医师大会暨中国抗癌协会肿瘤临床化疗专业委员会2014年学术年会
北京
中文
626-626
2014-07-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）