受体酪氨酸激酶AXL与肺腺癌细胞厄洛替尼耐药的关系及机制初探
目的：探讨受体酪氨酸激酶AXL与肺腺癌细胞厄洛替尼耐药的关系并初步探讨可能机制. 方法：用递增浓度的厄洛替尼处理厄洛替尼获得性耐药细胞株H1975,72H后用MTT法检测细胞活性;Western Blot法比较H1975与厄洛替尼敏感细胞株PC9的GAS6/AXL的表达和AXL活化情况;同时用AXL抑制剂BGB324和厄洛替尼处理H1975,72H后MTT法检测细胞活性;BGB324处理H1975,72H后Western Blot法检测相关蛋白表达情况.向PC9细胞稳定转染AXL基因，RT-qPCR、WesternBlot法分别在转录水平和蛋白水平检测相关基因的表达；镜下观察转染前后细胞形态的改变，用厄洛替尼处理PC9、PC9-AXL细胞，用Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力的改变，用MTT法、克隆形成实验检测细胞对厄洛替尼敏感性的改变；用BGB324和厄洛替尼同时处理PC9-AXL，用MTT法、克隆形成实验观察厄洛替尼敏感性改变，Transwell实验检测侵袭和迁移能力的改变，BGB324处理PC9-AXL，72H后Westem Blot法检测GAS6/AXL表达及AXL活化情况。 结果：H1975细胞的厄洛替尼EC50=662.5 umol/l，是PC9细胞株厄洛替尼EC50的约11倍；与PC9相比较，H1975的GAS6/AXL的表达及活化水平均明显增高；实验成功构建了稳定过表达AXL基因的PC9-AXL细胞；过表达AXL使PC9细胞形态由上皮细胞表型向间充质细胞表型转变，提高了PC9细胞的侵袭与迁移能力，且降低了PC9细胞对厄洛替尼的敏感性；BGB324降低H1975+PC9-AXL细胞AXL、GAS6蛋白表达，降低AXL磷酸化水平；使用BGB324可以逆转H1975对厄洛替尼的耐药，恢复PC9-AXL细胞对厄洛替尼的敏感性； 结论：过表达AXL能够降低肺腺癌细胞株对厄洛替尼的敏感性；使用AXL抑制剂BGB324能够恢复厄洛替尼耐药细胞株的敏感性；AXL过表达及其磷酸化水平p-AXL增高可能是肺腺癌细胞厄洛替尼耐药的重要机制之一。
肺腺癌 受体酪氨酸激酶 蛋白表达 厄洛替尼 耐药性
蒋顺
华中科技大学同济医学院附属协和医院肿瘤科
国内会议
第八届中国肿瘤内科大会、第三届中国肿瘤医师大会暨中国抗癌协会肿瘤临床化疗专业委员会2014年学术年会
北京
中文
725-725
2014-07-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）