葡聚糖接枝型高载量抗体介质的载量提升机制研究
以琼脂糖微球为基质的层析介质在制备过程中接枝葡聚糖被发现可以很好的提升介质载量和稳定性.本研究以Sepharose4FF为基质,经环氧活化后,与葡聚糖溶液(T40)反应,得到葡聚糖接枝型琼脂糖微球,再依次经环氧活化和偶联耐碱型Protein A配基,得到葡聚糖接枝型高载量抗体介质.测定介质载量,考察其耐碱性能,采用共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)等手段观察抗体在Protein A介质中的分布情况,探究葡聚糖接枝行为对介质吸附抗体过程的促进机制.本研究制备的葡聚糖接枝型Protein A介质对IgG的动态结合载量较常规Protein A介质提高了22％,能达到MabSelect SuRe载量的95％.采用0.5M NaOH对葡聚糖接枝型Protein A柱进行在线清洗操作(CIP),经过40次循环,介质对抗体仍能保持92％以上动态结合载量.层析谱图与初始状态基本一致,介质理化性质无变化.本研究还利用激光共聚焦显微镜观察ProteinA介质对抗体的吸附随时间的变化情况.随着保留时间的延长,FITC-IgG基本可以结合在整个葡聚糖接枝型Protein A介质中,而常规Protein A介质和MabSelect SuRe介质,直到达到吸附饱和,IgG也只能分布在介质外周,验证了葡聚糖接枝对Protein A的吸附抗体的促进作用.最后,采用原子力显微镜对葡聚糖接枝型Protein A介质微观表面形态进行观察,葡聚糖接枝后介质表面的粗糙程度会明显高于常规介质.
抗体亲和介质 葡聚糖接枝 制备工艺 载量提升机制 稳定性
朱凯 赵岚 黄永东 李强 苏志国 马光辉 王启宝
中国矿业大学(北京)化学与环境工程学院,北京 100083;中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室,北京 100190 中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室,北京 100190 中国矿业大学(北京)化学与环境工程学院,北京 100083
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2015-10-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）