表达H9亚型禽流感病毒HA基因的重组鸭肠炎病毒的生物特性研究
鸭肠炎病毒(Duck enteritis virus,DEV),又名鸭瘟病毒,可感染鸭、鹅及其它雁形目禽类,引起血管损伤、组织出血、消化道粘膜损伤、淋巴器官受损和实质性器官退行性病变的一种急性、接触性、败血性传染病——鸭病毒性肠炎或称鸭瘟.疱疹病毒基因组很大,可表达外源基因作为活载体疫苗,如表达鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒(HVT)活疫苗,免疫效果良好.DEV基因组为158-162kb,宿主范围小,且具有良好的免疫原性,免疫成年鸭后第3天即可产生一定的免疫力,第4天就能抵抗强毒攻击(内部资料),因此是很有前景的水禽疫苗病毒载体.本研究以DEV细胞适应株DNA为模板，利用PCR扩增出UL2基因上下游序列并克隆入pMD-18T载体；以UL2基因作为外源基因插入靶点及同源重组臂，将CMV启动子控制的含有GFPPgpt基因表达盒克隆入DEV UL2基因中，构建含GFP基因的转移质粒载体pT-UL2-GFP-gpt;用脂质体将其与DEV细胞适应株共转染鸡胚成纤维细胞，经过8轮蚀斑筛选，获以鸭源的H9N2亚型禽流感病毒HA基因替换GFP-gpt基因表达盒，构建含有HA基因表达盒的转移载体pT-UL2-HA，将其与重组病毒rDEV-△UL2-GFP共转染CEF细胞，进行反向蚀斑筛选，获得表达HA基因的重组鸭肠炎病毒rDEV-△UL2-HA。通过测序、间接免疫荧光方法（IFA）证明rDEV-△UL2-HA在CEF上连续传代20代，HA基因在重组病毒中稳定表达。动物试验结果表明，以1000 TCID50的rDEV-△UL2-HA免疫4周龄SPF鸭，可以诱导产生与DEV亲本毒相当的中和抗体效价，并能够抵抗致死性DEV的攻击；在免疫后28天，H9 HI抗体为1:512，能完全阻止免疫鸭排毒。以1000 TCIDso免疫3周龄SPF鸡，免瘦后14天，HI抗体效价为1:128，免疫后21天，HI抗体效价达1:1024。综上所述，本研究构建的DEV-UL2-HA对鸡和鸭均有良好的免疫原性，是一株理想的H9亚型禽流感-鸭病毒性肠炎重组活载体疫苗候选毒株。
H9亚型禽流感病毒 鸭肠炎病毒 UL2基因 HA基因 基因重组 生物特性
杨承槐 孙莹 李俊平 李岭 曹明慧 李启红 李慧姣
中国兽医药品监察所,北京,100081
国内会议
2016第六届中国兽药大会(中国畜牧兽医学会动物药品学分会第五届全国会员代表大会暨2016学术年会、中国微生物学会兽医微生物学专业委员会、中国畜牧兽医学会生物制品学分会2016年联合学术大会)
成都
中文
53-53
2016-09-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）