使用体积排阻和反相UPLC分析PEG修饰的蛋白
目的:由于PEG修饰生物偶联药物的疗效和潜在安全性问题都取决于它们的PEG修饰程度，因此开发两种UPLC(R)方法—SE-UPLC和RP-UPLC,用于分析蛋白PEG修饰过程中的PEG-蛋白偶联物、非PEG化蛋白以及游离活化PEG水平. 方法:采用SEC(SE-UPLC)和RPC(RP-UPLC)两种UPLC配置评估了50KDa分子量的蛋白、40KDa的活化PEG(aPEG)以及偶联物这三种物质的分离,两种方法均易于建立,且能够完全兼容蒸发光散射检测器(ELSD). 结果:在非PEG修饰蛋白、aPEG以及偶联物的Rh值有明显差异的情况下,SE-UPLC能够快速分析蛋白PEG修饰反应的产物以及未反应的组分.根据蛋白和PEG分子量组合的预测Rh值可知,在许多情况下SE-UPLC都无法提供分析三种组分所必须达到的分离程度.本文的结果证实了这一结论——该模型准确地预测出40KDa PEG和50KDa PEG修饰蛋白的Rh值差异不够显著,因而无法通过SE-UPLC进行分离.但是,在许多情况下,SE-UPLC仍可用于分离样品中经过修饰以及未修饰的组分,尤其是使用大分子量PEG(20和40KDa)修饰的样品. 结论:通过比较,发现对于本文所述的这一具体应用,可以基于三种组分的疏水性差异,使用300(A)BEH色谱柱在高温条件下(90℃)实现充分的分离.此外,还可通过串联使用紫外检测器和ELSD检测器对三种组分进行定量.
生物偶联药物 蛋白质 聚乙二醇 表面修饰 超高效液相色谱 疏水性
Stephan Koza Kenneth J.Fountain 毛燕妮
沃特世公司 美国马萨诸塞州米尔福德市 沃特世科技(上海)有限公司 上海201206
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2016-07-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）