绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白双抗体夹心ELISA检测方法的建立
绵羊肺腺瘤病毒(Jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV)是绵羊肺腺瘤(Ovine pulmonaryadenocarcinoma,OPA)的病原,绵羊肺腺瘤逆转录病毒囊膜蛋白(Env)具有转化细胞的生物学功能,是具有致癌功能的蛋白质,位于病毒粒子的最外层,是构成病毒粒子的主要结构蛋白,JSRV的囊膜蛋白包含约615个氨基酸,在378R和379G处被蛋白酶裂解为N末端的表面蛋白(surface protein,SU)和C末端的跨膜蛋白(transmembrane protein,TM),两者以二硫键连接,SU和TM在绵羊肺腺瘤病毒吸附和侵入宿主细胞的过程中发挥重要作用.由于在绵羊的基因组中存在约27拷贝的与外源性绵羊肺腺瘤病毒（ex-JSRV）高同源性（90％以上）的内源性绵羊肺腺瘤病毒（en-JSRV），患OPA的病羊体内未曾检测到JSRV的循环抗体，不能用常规的血清学方法进行诊断，因此特异性抗原的检测是诊断OPA的有效方法。位于囊膜蛋白的后44位氨基酸，即胞质尾区蛋白（CT，572RGMVRDFLKMRVEMLHMKYRNMLQHQHLMELLKNKERGDAGDDP615）是en-JSRV与ex-JSRV主要高可变区，也是B细胞抗原的表位优势区。利用该段多肽成功的制备了抗CT的特异性单克隆抗体，即抗JSRV-Env572–615绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白的特异性鼠单克隆抗体。利用具有较多抗原表位，并保守的截短囊膜蛋白JSRV-Env54–394(包含部分SU和TM)，制备抗JSRV-Env54–394绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白的特异性兔多克隆抗体。用这两种不同动物源的单克隆抗体和多克隆抗体分别做检测抗体和包被抗体，建立检测绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白的双抗体夹心ELISA方法。本试验建立的双抗体夹心ELISA，使用HRP标记的CT单抗，用提前包被多抗并封闭好的的酶标板检测只需150min即可得出结果，有利于高通量快速的检测OPA。
绵羊肺腺瘤 绵羊肺腺瘤病毒 囊膜蛋白 单克隆抗体 多克隆抗体 检测方法
刘月 刘淑英 张宇飞 孙晓林
内蒙古农业大学兽医学院,呼和浩特010018 农业部动物临床诊疗技术重点实验室,呼和浩特010018
国内会议
中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十一次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理学专业委员会第二十次学术研讨会
太原
中文
195-195
2015-07-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）