PCV2诱导PAMs分泌Ⅰ型干扰素信号途径初探
为了研究PCV2引发的仔猪肺泡巨噬细胞(PAMs)分泌Ⅰ型干扰素的机制.选用14头经ELISA和荧光定量PCR方法检测猪圆环病毒2型(PCV2)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)血清抗体和抗原均为阴性的普通断奶仔猪,无菌分离PAMs,实验一:分为对照组、PCV2组、抑制剂组和抑制剂-PCV2组进行体外培养,分别在培养0h、24h、48h和72h收集PAMs和细胞培养上清.间接免疫荧光法定位检测PCV2感染PAMs的情况;ELISA方法检测培养上清液中IFN-α和IFN-β的动态变化;Western Blot方法检测胞核p65、胞浆p65和胞浆p-ⅠκBα蛋白的表达变化.实验二:体外培养的PAMs分为对照组、MyD88干扰组、PCV2组和干扰-PCV2组.于培养后0h、4h、6h、12h、24h和48h收集细胞,提取RNA.用荧光定量PCR方法检测各时间点MyD88、IFN-α、IFN-β、IRF3、IRF7和IKKα的mRNA水平.结果表明,PCV2可感染PAMs,并主要存在于细胞浆中.细胞培养上清液中,PCV2组IFN-α含量明显高于对照组(P＜0.05),而抑制剂-PCV2组IFN-α含量明显高于PCV2组(P＜0.05).抑制剂-PCV2组细胞培养上清液中IFN-β含量在72h显著高于PCV2组(P＜0.05).PCV2组PAMs胞核中NF-κB/p65含量,胞浆内p-IκBα的蛋白含量显著高于对照组(P＜0.01或P＜0.05);抑制剂和抑制剂-PCV2组PAMs胞核中NF-κB/p65含量,胞浆内p-IκBα的蛋白含量均显著低于对照组(P＜0.01或P＜0.05).MyD88siRNA干扰PAMs24h后,76％的MyD88基因被沉默.PCV2组的MyD88转录水平在12h显著高于对照组(P＜0.05),干扰-PCV2组的MyD88转录水平极显著低于PCV2组(P＜0.01);PCV2组IFN-α转录水平在病毒作用4h、6h、12h、24h和48h后均显著高于对照组(P＜0.01或P＜0.05),而干扰-PCV2组IFN-α的转录水平在病毒作用6h、12h、24h和48h后均显著低于PCV2组(P＜0.01或P＜0.05);PCV2组的IFN-β转录水平在病毒作用24h显著高于对照组(P＜0.05);PCV2组IRF-3转录水平分别在病毒作用6h、12h和24h显著高于对照组(P＜0.05),干扰-PCV2组IRF-3转录水平在病毒作用12h和24h后显著低于PCV2组(P＜0.05);PCV2组的IRF-7转录水平在病毒作用12h和24h后显著高于对照组(P＜0.05),干扰-PCV2组的IRF-7转录水平在病毒作用12h和24h后显著低于PCV2组(P＜0.05);PCV2组的IKKα转录水平在4h、6h和12h显著高于对照组(P＜0.05),干扰-PCV2组的IKKα转录水平显著低于PCV2组(P＜0.05).PCV2可通过MyD88-IKKα-IRF信号途径上调PAMs中Ⅰ型干扰素的转录.
猪圆环病毒2型 猪肺泡巨噬细胞 Ⅰ型干扰素 信号途径
陈萌萌 张亚群 韩俊源 段滇宁 张书霞
南京农业大学动物医学院,南京210095
国内会议
中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十一次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理学专业委员会第二十次学术研讨会
太原
中文
258-270
2015-07-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）