绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA方法的初步建立

摘要：

为了制备抗绵羊肺腺瘤病毒(Jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV)囊膜蛋白(ENV)胞质尾区(CT)的单克隆抗体,利用生物信息学分析绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白氨基酸序列,根据分析结果合成多肽,将此多肽分别连接钥孔血蓝蛋白(CT-KLH)和牛血清白蛋白(CT-BSA),用CT-KLH作为抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合.建立间接ELISA方法筛选分泌抗CT蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,获得1株能稳定分泌抗CT蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为8E5,亚类为IgG2a/κ.间接ELISA检测培养上清效价为6.4×103腹水效价为1×105.Western blot及免疫组化结果显示,这株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体能识别JSRV抗原,与其发生特异性反应.试验结果证明,单抗8E5是OPA的重要诊断试剂,为更深入地研究JSRV及其蛋白的生物学功能奠定了基础,应用8E5细胞株分泌的单克隆抗体建立了JSRV-ENV的双抗体夹心ELISA检测方法,该ELISA检测方法特异性,重复性和敏感性良好,为快速检测诊断绵羊肺腺瘤和研究囊膜蛋白功能奠定了基础.

关键词： 绵羊肺腺瘤 绵羊肺腺瘤病毒 囊膜蛋白 单克隆抗体 酶联免疫吸附剂测定

作者: 刘月 张宇飞 孙晓林 刘淑英

作者单位: 内蒙古农业大学兽医学院,呼和浩特010018 内蒙古农业大学兽医学院,呼和浩特010018;农业部动物临床诊疗技术重点实验室,呼和浩特,010018

会议类型: 国内会议

会议名称: 中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十一次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理学专业委员会第二十次学术研讨会

会议地点: 太原

会议语种:中文

页码: 356-365

在线出版日期: 2015-07-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）