永生化猪黄体细胞系的建立

摘要：

目的:本研究旨在建立一株保留猪黄体细胞主要生物学特性和功能的猪黄体细胞系,以期为黄体功能研究提供一个可靠的细胞模型. 方法:采集妊娠6～8周的健康母猪的卵巢,通过胶原酶消化法和不连续密度梯度离心法获得原代猪黄体细胞后,利用脂质体法将pCI-neo-hTERT质粒导入原代猪黄体细胞中,经G418筛选获得阳性克隆细胞;经传代50代后通过化学染色法、RT-PCR法对所获得的黄体细胞的生物学功能进行验证;最后,通过RT-PCR法和ELISA法检测hTERT的表达及活性状态,并通过软琼脂克隆实验和裸鼠致瘤实验验证检测所获得的猪黄体细胞是否具有无恶性转化的特性. 结果:转染后50代的细胞形态正常、并保持较强的生长能力,3β-HSD活性染色和油红O染色鉴定发现其阳性率均达95％以上;且保留了原代猪黄体细胞激素合成中的关键基因和受体,及对LH和PGF2α的应激反应;同时,转染后30和50代的猪黄体细胞均表达hTERT基因且维持较高的生物活性.软琼脂克隆试验和裸鼠致瘤试验显示,转染后第50代黄体细胞不具有悬浮生长能力和裸鼠致瘤性. 结论:本研究通过将hTERT基因导入原代猪黄体细胞,建立了永生化的猪黄体细胞,该细胞系保留了原代猪黄体细胞的形态学特征和主要生物学特性.

关键词： 猪黄体细胞 生物学特性 形态学特征

作者: 张樑 黄勇 赵晓民 童德文

作者单位: 西北农林科技大学动物医学院,陕西杨凌712100

会议类型: 国内会议

会议名称: 中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十一次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理学专业委员会第二十次学术研讨会

会议地点: 太原

会议语种:中文

页码: 435-442

在线出版日期: 2015-07-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）