猪源抗体基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达
为了制备原核表达猪源单链重组抗体,本实验利用FITC-山羊抗猪IgG标记猪外周血淋巴细胞,通过FACS的方法筛选出IgG+B细胞.以IgG+B细胞为模板,利用RT-PCR技术扩增抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL).测序之后,将扩增的可变区与本实验室保存的猪源抗体恒定区连接.通过Linker序列”(Gly4Ser)3”,最终将重链和轻链连接,构成H-linker-L.将该序列连接到原核表达载体pET-28a进行原核表达,纯化.Western-blot鉴定结果表明,该重组蛋白能够与兔抗猪IgG二抗反应.这说明构建的重组抗体确实为猪源抗体.
猪源抗体 基因克隆 大肠杆菌 B淋巴细胞
王香玲 柴政 田华彬 符芳 姜福成 郑楠 张雪云 郭佃磊 李昆鹏 李曦
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室,黑龙江哈尔滨 150001 哈尔滨师范大学生命科学与技术学院,黑龙江哈尔滨 150025 黑龙江八一农垦大学,黑龙江大庆 163319
国内会议
武汉
中文
370-376
2014-06-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）