斑马鱼BSC14基因影响心血管发育的研究
BSC14基因是实验室鉴定的一个心脏发育候选基因,目前尚未见任何功能研究的报道.通过整胚原位杂交技术鉴定了BSC14基因在胚胎发育中的时空表达谱:该基因在细胞就有表达,受精后24hpf表达于原始的心管,随着心管的发育,表达于整个心脏以及造血区.制备了BSC14的多克隆抗体,通过Western-blot证明BSC14蛋白在心脏,血液等组织中高表达,结果提示BSC14可能与心血管的发育有关.通过斑马鱼BSC14基因沉默和过表达模型研究基因在心血管发育中的作用.荧光蛋白融合标记实验证明BSC14-MO可以有效地阻抑斑马鱼胚胎BSC14的表达，敲低BSC14的表达导致心室发育不良、心房扩张、心率缓慢、心律不齐、血管变窄，血细胞数目减少等表型。BSC14基因过表达同样也引起心血管发育的异常。克隆了BSC14启动子，制备了BSC14启动子转基因品系，发现BSC14增强子EGFP的表达模式与原位杂交结果一致。为了研究BSC14在斑马鱼心血管发育过程中的分子机制，通过酵母双杂交实验得到与BSC14相互作用的基因NK6，通过Co-IP实验验证BSC14与NK6之间确实存在相互作用。进一步通过Talen敲除方法，得到了三种BSC14的敲除品系的F2代斑马鱼，发现敲除纯合子的表型与之前MO敲低相似且敲除BSC14之后出现了部分致死现象。进一步在十几种与心血管发育相关的转基因斑马鱼中将BSC14基因进行了敲除，并且通过RT-PCR实验检测了约100种与心血管发育相关途径的关键因子，结果表明大部分基因的表达出现明显下调甚至不表达的现象。结合RNA-sequence结果通过chip等实验进一步阐明其分子作用机制的研究正在进行中。
心血管发育 BSC14启动子 基因沉默 分子机制
陈婷芳 邓云 屈永贵 王飞英 吴静 高晶 于泽阳 吴秀山 王跃群
湖南师范大学生命科学院、心脏发育研究中心、湖南省生物发育工程及新产品研发协同创新中心,长沙 410081
国内会议
厦门
中文
41-41
2014-07-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）