珍稀濒危植物钟萼木ISSR-PCR反应体系的建立和优化

摘要：

为建立适用于钟萼木的ISSR(Inter-Simple Sequence Repeat,ISSR)反应体系,采用单因素法筛选出影响ISSR-PCR的主要因素的最适宜值,建立了优化的钟萼木ISSR-PCR反应体系和扩增程序.结果表明,优化的反应体系为:反应体积20 μ1,Mg2+(10 mmol/L)2 mmol/L,引物(10 μmol/L)0.5μmol/L,dNTP(10 mmol/L)0.6 mmol/L,模版DNA(20 ng/μl)16 ng,Taq酶(5U/μl) 1.5 U,用灭菌的双蒸水补齐.优化的扩增体系为:94℃预变性5 min,然后进入38个循环,94℃变性45 s,52～56℃(各引物退火温度不同)退火60 s,72 ℃延伸90 s,循环完毕后于72℃延伸10 min,最后保存于4℃.

关键词： 钟萼木 简单序列重复区间扩增多态性 聚合酶链反应 树种保护

作者: 林国锋 陈义堂 黄建兰 张晓萍 陈世品

作者单位: 福建农林大学林学院,福州350002 福州植物园,福州350000 福建省闽江源国家级自然保护区,建宁354500

会议类型: 国内会议

会议名称: 2012年中国植物园学术年会

会议地点: 重庆

会议语种:中文

页码: 117-124

在线出版日期: 2012-11-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）