等温滴定量热法研究乙酰胆碱酯酶的酶促反应动力学
乙酰胆碱酯酶(Acetylcholinesterase,AChE)是一种在生物神经传导中起关键作用的酶.它在农药上是有机磷和氨基甲酸酯类杀虫剂的作用靶标,在医药上AChE抑制剂可用于治疗各种疾病如阿尔茨海默症、重症肌无力和青光眼等.因此关于AChE的活性测试方法在临床诊断和新药研发中就显得尤其重要,传统的测量方法一般是光谱法或者电化学法,近年来发展了一种研究反应热信号的方法,即等温滴定量热法(Isothermal Titration Calorimetry,ITC),它通过高灵敏度、高自动化的微量量热仪连续、准确地监测和记录一个变化过程的量热曲线,原位、在线和无损伤地同时提供热力学和动力学信息.本文中运用这种方法来研究AChE的酶促反应动力学.实验结果不仅与反应的温度有关，还与酶的浓度，底物的浓度有关；更令人可喜的是在0.016μM AChE，1mM ATC，T=25℃时与0.002μM AChE，2mM ATC，T=30℃得到的Km值在一个数量级上，而且与紫外可见方法测得的Km值相当。由于ITC方法追溯到了反应的本质，测量反应本身的热量变化，与其它活性测试方法相比有明显的优越性。用ITC方法研究AChE的酶促反应动力学时，可以得到米氏常数Km等动力学参数，但需要对其条件进行摸索，不断的改进和优化，由此也说明了ITC法可以作为一种测定AChE酶促反应动力学参数的一种方法，在酶催化反应研究尤其是热力学研究中可以发挥更大的潜力。
乙酰胆碱酯酶 酶促反应 动力学参数 等温滴定量热法
沈艳青 刘晶晶 杨文超 杨光富
华中师范大学化学学院农药与化学生物学教育部重点实验室,湖北省武汉市 430079
国内会议
武汉
中文
98-100
2012-06-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）