基于毛细管电泳技术牡丹的SRAP-PCR反应体系优化及引物筛选
本试验以牡丹叶片DNA为模板,对SRAP-PCR反应程序进行了研究,确定了适合的反应程序,即94℃预变性5min;94℃变性1min,33℃退火1min,72℃延伸1min,共5个循环;随后94℃变性1min,52℃退火1min,72℃延伸1min,共35个循环;最后72℃延伸10min.并基于毛细管电泳技术,采用正交设计L18(37)对SRAP-PCR反应体系的五因素(Taq酶,Mg2+,模板DNA,dNTP,引物)3个水平对牡丹SRAPPCR反应体系进行了研究,建立了牡丹SRAP最佳反应体系:模板DNA 50ng,dNTP 0.25 mmolL-1,Mg2+浓度2.5 mmolL-,引物浓度0.4 μmolL-,Taq DNA聚合酶0.5U,总体积为25 μL.Taq DNA聚合酶0.5U,总体积为25μL.各因素对扩增结果影响程度均不同:dNTPs＞引物＞DNA模板＞Mg2+＞Taq酶.运用该体系从756个SRAP引物组合中筛选出扩增条带清晰、多态性好的26个引物组合,并证明了该体系稳定可靠.这一体系的建立及多态性引物组合的筛选为今后利用SRAP技术进行牡丹的相关研究奠定了科学基础.
牡丹 相关序列扩增多态性 毛细管电泳 反应程序 引物筛选
史倩倩 王雁 周琳
中国林业科学研究院林业研究所,国家林业局林木培育重点实验室,北京100091
国内会议
银川
中文
251-257
2011-08-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）