低氧环境对人上皮性卵巢癌细胞株上皮间质转化及侵袭转移能力的影响及机制探讨
目的:探讨低氧环境对人卵巢癌细胞发生上皮间质转化(Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT)和改变侵袭能力中的作用及可能机制. 方法:培养人卵巢癌细胞株SKOV-3、3AO,每株细胞分为对照组,CoCl2(模拟低氧环境)组,VPL(钙离子拮抗剂)组和VPL+ CoCl2组.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度CoCl2(25、50、100、150、200μmol/L)作用不同时间(12h、24h、48h)对SKOV-3,3AO生长情况的影响;同时用倒置相差显微镜下观察缺氧后细胞形态的改变;蛋白印迹法(western blotting)检测SKOV-3,3AO细胞中缺氧诱导因子-1 α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)的表达,并观察各实验组转录因子Twist、上皮型钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)及神经型钙黏蛋白(N-cadherin,N-cad)表达的变化;体外侵袭实验穿膜小室(Transwell小室)检测细胞的侵袭能力. 结果:1)CoCl2作用后细胞的存活率较对照组明显降低(P＜0.05).2)细胞在常氧和缺氧状态下的形态变化:常氧下:SKOV-3细胞呈短梭形,3AO呈长梭形,排列规则,呈上皮表型;缺氧状态下细胞极性丢失,部分细胞伸出伪足,呈多角形.细胞排列紊乱,细胞间黏附减弱.3)western blotting结果:CoCl2能体外模拟细胞缺氧环境,诱导HIF-1 α高表达.SKOV-3和3AO细胞分别在50和100 μ mol/L CoC12作用24h后,HIF1 αα蛋白的表达量最高(P＜0.05);CoC12组中HIF-1α,Twist,N-cad蛋白的表达明显高于对照组(P＜0.01),CoC12+VPL组中三种蛋白的表达较CoCl2组明显降低(P＜0.05);而CoC12组中E-cad蛋白的表达与对照组相比明显降低(P＜0.01),CoC12+VPL组中E-cad蛋白的表达明显高于CoC12组;VPL组与对照组相比各蛋白表达的变化无明显差异(P＞0.05).4)对照组,Cocl2组,VPL组,VPL+Cocl2组的中SKOV-3的穿膜细胞数分别为(23±5),(108±17),(53±7),(18±5);3AO细胞分别为(16±4),(131±20),(49±11),(12±3).CoC12组两种细胞的穿膜数较对照组明显增多(P＜0.01);CoC12+VPL组两种细胞的穿膜数较CoC12组均明显减少(P＜0.05). 结论:钙信号途径参与了低氧环境下HIF-1α调节卵巢癌SKOV-3、3AO细胞中Twist的表达,从而实现诱导这两种细胞EMT的发生及促进其侵袭作用.
卵巢癌 上皮间质转化 侵袭能力 低氧环境 发病机制
徐春琳 曹珊 闫晓楠 王惠兰
河北医科大学第二医院
国内会议
合肥
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243-252
2012-07-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）