人心肌红蛋白多肽的基因克隆、原核表达及抗体制备
本研究使用基因重组技术通过原核表达获得单表位的人心肌红蛋白肽段,纯化肽段后免疫兔子,以此制备出针对不同表位的多克隆抗体。利用软件分析人心肌红蛋白的抗原表位,得到4个肽段(片段1、2、3、4),PCR扩增其基因序列,连接到表达载体pET-GST中,转化至E.coli BL21进行诱导表达。在A600至0.5-0.8时,加入IPTG浓度为0.1mmol/L,16℃,200r/min诱导过夜(20h),各个片段均能大量表达。将MB-GST融合蛋白通过GST-Sepharose4B亲和层析柱进行纯化,用12％SDS-PAGE检测,得到大小为28kD左右的融合蛋白,表达量为15mg/L.将亲和纯化的肽段与佐剂乳化后免疫新西兰大白兔,多次免疫后检测血清效价,获得效价高的多抗。结果表明4个多肽抗体经Western blot检测均具有较好的特异性。
肌红蛋白 多克隆抗体 多肽抗体 基因重组 原核表达
齐文闯 申魁魁 付新中 周燕娟 滕昆 熊露群 肖佳民
国内会议
贵阳
中文
387-391
2016-07-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）