酵母双杂交系统检测山核桃MADS蛋白间的相互作用
MADS-box基因几乎遍布整个植物界,在植物花发育的整个阶段起到了极为关键的作用.MADS-box基因所编码的蛋白为MADS-box转录因子,以二聚体化的形式通过其保守结构域与特定的DNA序列相结合来调控基因的表达.MADS-box转录因子的同源与异源二聚化增加了其与DNA结合的选择性,以数量相对较少的蛋白创造更多的与DNA广泛结合的复合物.山核桃(Carya cathayensis)是浙江区域优势明显的特色经济干果,是浙西北山区农民实现富裕的重要经济支柱.山核桃的成花问题的研究不仅具有重大的理论意义,对于提高产量和经济效益也有实际意义.本课题通过454测序克隆得到了7个山核桃相关MADS-box的ORF,通过生物信息学比较分别命名为CcAP1、CcAGL24、CcSOC1、CcFLC1、CcFLC2、CcTM3、CcSJ.依照MATCHMAKER GAL4 Two-Hybrid System 3(Clontech)将各个CcORFs构建到酵母表达载体pGADT7/pGBKT7中,转化入相应的酵母细胞AH109/Y187中,自激活检测后进行双杂交,检测各MADS-box转录因子间的相互作用关系.实验发现:CcAP1、CcAGL24、CcFLC1、CcFLC2相互作用情况与拟南芥同源基因表现一致,CcSOC1则和其余MADS-box均没有表现相互作用.分离纯化,力求取得蛋白结晶,充分解释CcSOC1蛋白的聚合方式.
山核桃 MADS蛋白 酵母双杂交系统
侯传明 汤叶根 王正加 徐英武
亚热带森林培育国家重点实验室培育基地,浙江农林大学,浙江,临安311300
国内会议
福州
中文
78-82
2013-09-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）