基于信号增加策略构建光电免疫传感器检测M.SssI甲基转移酶活性
DNA甲基化作为在基因组中一种重要的表观遗传学修饰,无论在真核生物还是原核生物中,都扮演着重要的角色.反常的基因甲基化可以导致各种疾病,例如癌症等.而甲基化程度与甲基转移酶密切相关,因此快速,灵敏检测甲基转移酶活性对疾病诊断与治疗具有重要意义.现存的甲基化检测方法主要有滚环扩增检测法,电化学生物传感器检测法,比色检测法等,但这些方法存在一些缺点,例如:成本高,耗时长等.方面。本文构建了一种基于5一甲基胞嘧啶抗体作为5-甲基化胞嘧啶识别单元，链霉亲和素标记的纳米金作为信号扩增单元，生物素标记的碱性磷酸酯酶作为酶催化单元，Bi2S3作为光电转换单元的新型光电免疫传感器，实现对M. SssI甲基转移酶活性的检测。首先茎上含有CpG序列的发卡DNA1上的胞嘧啶被M.SssI甲基化，再与生物素标记的DNA2杂交，打开发卡结构，形成双链DNA，然后双链DNA通过特异性免疫反应固定到5一甲基胞嘧啶抗体修饰的ITO电极上。通过生物素与链霉亲和素的特异性反应，链霉亲和素标记的纳米金与生物素标记的碱性磷酸酯酶依次固定到电极表面。碱性磷酸酯酶催化抗坏血酸磷酸酯原位产生抗坏血酸作为电子供体，使光电信号增加。实验表明，该光电免疫传感器具有较高的灵敏性，可以用作甲基转移酶活性检测，在本工作中通过利用半导体光电材料和特定抗体修饰电极并结合酶催化信号放大技术，构建了一种可以灵敏检测DNA甲基化及DNA甲基转移酶活性的光电化学生物传感器。该传感器具有较高的灵敏性，选择性，为检测甲基转移酶活性与抑制因子的筛选提供了新的思路。
光电免疫传感器 纳米金 碱性磷酸酯酶 信号增加策略 甲基转移酶 活性检测
杨治庆 殷焕顺 艾仕云
山东农业大学化学与材料科学学院,山东泰安,271018
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2014-11-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）