基于ExoⅢ的循环扩增电化学策略检测Dam甲基转移酶活性
DNA甲基化是表观遗传学的重要一部分,是由DNA甲基转移酶催化甲基供体(S-腺苷甲硫氨酸),在特定的DNA序列中的胞嘧啶或腺嘌呤增加一个甲基.经过近半个世纪的研究,DNA甲基化水平变化已被公认是人类癌症的一种特征性改变,并伴随恶性肿瘤的发生、发展而变化.因此,DNA甲基化水平变化的检测对肿瘤的诊断、预后及肿瘤发生、发展的检测都至关重要。本文利用ExoⅢ和磁性微球构建了一种电化学生物传感器，基于循环扩增策略检测Dam甲基转移酶活性。首先含有Dam甲基转移酶识别序列GATC的双链DNA(3’突出)固定到EDC活化的羟基修饰的磁性微球上，然后加入Dam甲基转移酶甲基化，磁分离后加入DpnI后，甲基化的DNA可被切割，由J突出的粘性末端变成平末端。在ExoIII的作用下，平末端的双链DNA可被切割，释放出一条单链DNA C sDNA 1)。最后把释放的单链DNA与ExoⅢ一起滴加到固定有互补单链DNA (sDNA2纳米金修饰的金电极上(AuNPs/Au）。一段时间见后，以这根电极为工作电极，饱和甘汞电极电极做参比电极，铂电极做对电极，KCl溶液做检测液。以微分脉冲伏安法(DPV)检测Fe(CN)的电信号。甲基化程度越高，释放的sDNA1越多，从而与电极表面杂交的程度越高，在ExoⅢ的作用下sDNA2被切割，从而使电极表面对Fe(CN)的静电排斥作用与空间位阻减小，引起电流增加。电流大小直接反应甲基化程度，该电化学生物传感器具有较高的灵敏性，选择性，为检测甲基转移酶活性与抑制因子的筛选提供了新的思路。
电化学传感器 制备工艺 循环扩增策略 甲基转移酶 活性检测
杨治庆 殷焕顺 艾仕云
山东农业大学化学与材料科学学院,山东泰安,271018
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2014-11-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）