基于链置换扩增的二茂铁猝灭电致化学发光的化学生物传感器用于检测microRNA的研究
链置换扩增技术(SDA)是一种基于链置换反应的等温扩增技术,具有操作简单,条件容易控制的优点,被广泛应用于荧光标记的DNA检测.本文对链置换扩增的模板进行改进,成功将此技术与电致化学发光检测方法结合起来,构建了一种简单而灵敏的电化学发光传感器用于microRNA的检测。叔胺>仲胺>伯胺。本文尝试将三(2-氨基乙基)胺(TAEA)与羧基联吡啶钌交联，以达到将共反应基团叔胺引入发光试剂分子内部，极大增强电子转移效率，增强电致化学发光信号，以此合成一种自增强的联吡啶钌衍生物。C60具有良好的光学性质，良好的成膜性，同时，多不饱和结构，也提供了一种信号放大的可能方式。根据扩增目标的序列，设计一条含有与目标链互补序列，切口酶剪切识别位点，引物的互补序列，并将以上序列合理排列的模板链，采用切口酶以及带有链置换活性的DNA聚合酶，在适宜的条件下，进行链聚合，剪切，链置换的循环，以实现目标DNA扩增的目的。本文为了能将链置换扩增技术更好的移植到电化学方法中，采用了一条双链的模板，最后将microRNA检测转变为扩增目标链的检测。相比单链模板，本方法解决了目标链与模板杂交影响检测的问题，同时将DNA扩增过程与检测过程分离，实现模块化操作过程，极大地降低了RNA实验条件控制对最终检测精度的影响。所制备的传感器在pH=7.4的PBS中检测，对microRNA的浓度变化的响应在1fM-1pM范围内表现出良好的线性。
化学生物传感器 电致化学发光技术 链置换扩增技术 微小核糖核酸检测
陈安懿 卓颖 柴雅琴 袁若
发光与实时分析化学教育部重点实验室,西南大学化学化工学院,重庆400715
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2014-11-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）