重组同型半胱氨酸α,γ-裂解酶的表达纯化及表征
目的：研究以包涵体形式表达的重组同型半胱氨酸α,γ-裂解酶的表达、纯化,对其活性进行检测并对其酶学性质进行表征. 方法：将同型半胱氨酸α,γ-裂解酶的重组表达载体pET-15b/rHCYase转化大肠埃希菌BL21中,进行优化大量表达.使用Ni2亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,再通过His-Trap脱盐柱脱盐,采用MBTH法检测目的蛋白活性,并对该酶进行了表征. 结果：重组蛋白在大肠埃希菌中可以高效表达,产量为204mg·L-1,比活约206 U·mg-1.相对分子质量为45 200.重组酶的最适反应温度为35℃,酶活性稳定的温度范围为20～35℃.重组酶的最适反应pH为7.5,4℃下在pH7.5的缓冲溶液中保温5h酶稳定性最高. 结论：成功克隆和表达了rHCYase蛋白,并得到高产高酶活的可溶性蛋白,对同型半胱氨酸检测试剂的开发有一定的潜在应用价值.
同型半胱氨酸α,γ-裂解酶 基因表达 酶学性质 药理活性
王利群 孙培培 曹利民 奚学志 王炜煜
常州大学制药与生命科学学院,常州213164 常州英赞美科生物科技有限公司,常州213022 华中科技大学同济医学院附属同济医院普外科,武汉430030
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2015-05-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）